Relatório-de-Bioquímica-Cinética-Enzimática
Por: Sara • 7/11/2018 • 1.574 Palavras (7 Páginas) • 389 Visualizações
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Tubo nº
Solução padrão de PNP (µL)
Tampão Tris-HCl pH 9,5 (µL)
Solução de NaOH 2M (µL)
B
0
800
200
1
75
725
200
2
150
650
200
3
225
575
200
4
300
500
200
5
375
425
200
6
450
350
200
7
525
275
200
Os tubos foram manualmente homogeneizados e após isto foram transferidos 200 µL de cada tubo para uma placa de 96 poços para leitura em 405 nm.
b) Curva de substrato
Foram transferidas, com auxílio de pipeta automática, alíquotas das soluções indicadas para os tubos de ensaio devidamente rotulados segundo a tabela abaixo, exceto a solução de enzima e de NaOH.
Tubo nº
Tampão
Tris-HCl pH 9,5
PNPP
1mM (μL)
Enzima
(μL)
Solução de NaOH (μL)
B
725
25
20
200
1
725
25
20
200
2
700
50
20
200
3
675
75
20
200
4
650
100
20
200
5
600
150
20
200
6
550
200
20
200
7
500
250
20
200
8
450
300
20
200
9
375
375
20
200
10
300
450
20
200
11
225
525
20
200
12
150
600
20
200
13
75
675
20
200
No tubo “B” foi adicionado a enzima somente após a solução de NaOH. Com auxílio de um pipetador automático, foram adicionadas as soluções de enzima aos tubos 1 a 13 em intervalos de 5 segundos. Os tubos foram homogeneizados manualmente e incubados em temperatura ambiente por 5 minutos.
A reação foi paralisada adicionando NaOH 2M aos tubos de 1 a 13 em intervalos de 5 segundos. Os tubos foram homogeneizados manualmente. Foram transferidos 200 µL de cada tubo para uma placa de 96 poços para leitura em 405 nm.
c) Influência do inibidor
Foram transferidas, com auxílio de pipetas automáticas, alíquotas das soluções indicadas para tubos de ensaio devidamente rotulados segundo a tabela abaixo, exceto a solução de enzima e de NaOH.
Tubo nº
Tampão Tris-HCl pH= 9,5
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