Determinação da Cafeína por HPLC - A cafeína
Por: eduardamaia17 • 6/10/2017 • 1.774 Palavras (8 Páginas) • 1.408 Visualizações
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soluções de 100 ppm, 50 ppm, 20 ppm e 8 ppm foi utilizado diluição seriada para maior precisão e diminuir os riscos de erros por grandes diluições a partir da solução de 200 ppm. Assim, foi encontrado o volume necessário que foi utilizado para cada solução.
C1V1=C2V2
200 ppm x V1 = 100 ppm x 50 mL
V1= 25 mL
C1V1=C2V2
100 ppm x V1 = 50 ppm x 50 mL
V1= 25 mL
C1V1=C2V2
50 ppm x V1 = 20 ppm x 50 mL
V1= 20 mL
C1V1=C2V2
20 ppm x V1 = 8 ppm x 50 mL
V1 = 20 mL
Entretanto, o valor pesado da amostra de cafeína foi de 11,2 mg ao invés de 10 mg, sendo necessário a correção dos cálculos para os valores reais, considerando o grau de pureza da amostra que era de 99%. Assim,
11,2 mg _____ 100%
X ______ 99%
X = 11,088 mg
As concentrações reais também precisaram ser reajustadas, obtendo:
10 mg _____ 200 ppm
11, 08 mg ____ X
X = 221, 6 ppm
C1V1 = C2V2
221,6 ppm x 25 mL = C2 x 50 mL
C2 = 110,8 ppm
C1V1 = C2V2
110,8 x 25 mL = C2 x 50 mL
C2 = 55,4 ppm
C1V1 = C2V2
55,40 x 20 mL = C2 x 50 mL
C2 = 22,16 ppm
C1V1 = C2V2
22,16 x 20 mL = C2 x 50 mL
C2 = 8,864 ppm
Após as leituras de absorbância para cada concentração obtida, foi montado o gráfico para obtenção da reta, obtendo R^2 = 1.
Para determinar o tempo de retenção da cafeína utilizando o HPLC foi utilizado o padrão de 50 ppm, pois o mesmo se encontra na faixa de linearidade .E após obtenção da curva analítica, foram analisadas as amostras das bebidas energéticas: Red Bull, Guaramix e Night Power para posterior analise das concentrações. Para as concentrações dos energéticos Red Bull e Night Power ficaram na faixa de linearidade foram necessárias duas diluições de ½ (5 ml/10 ml balão).
Resultados e Discursão
O padrão de cafeína de 50 ppm foi analisado no CLAE por 15 minutos no comprimento de onda de 273 nm (λmax. da cafeína). Na figura abaixo é apresentado o cromatograma do respectivo padrão de cafeína. Através da cromatograma abaixo se pode verificar que o tempo de retenção da cafeína é de aproximadamente 8 minutos.
Cromatograma do padrão de cafeína de 50 ppm a 273 nm
A partir dos relatórios de cada solução padrão gerados por CLAE, obteve os valores exatos da área do pico, e com esses dados construir uma curva padrão de cafeína na qual se apresentam a área do pico do cromatograma em função da concentração de cafeína.
Curva padrão de cafeína obtida através de CLAE
Em seguida, analisaram-se os energéticos Guaramix, NighT Power e Red Bull no CLAE por 15 minutos, em triplicata, no comprimento de onda de 273 nm (λmax da cafeína). Nas figuras abaixo, são apresentados os cromatogramas do Guaramix e Night Power, respectivamente.
Análise do energético Guaramix em CLAE
Análise do energético Night Power em CLAE
Nos cromatogramas apresentados pode-se observar claramente o pico que representa a cafeína presente nas amostras, no tempo de retenção aproximado de 8 minutos. As concentrações de cafeína presentes nos energéticos Red Bull, Guaramix e Night Power, foram calculadas utilizando a equação da reta da curva padrão de cafeína, y = 108152x + 39183, na qual y representa a área do pico e x representa a concentração de cafeína. Na tabela abaixo estão os valores de área do pico de cada triplicata dos energéticos utilizados. Os valores foram retirados dos relatórios gerados pelo cromatógrafo.
Energético Áreas Média
Red Bull 8.274.882,84
8.556.875,227
8.875.720,42
8.520.022,42
Guaramix 4.482.732,23
4.682.778,297
4.628.291,32
4.937.311,34
Night Power
8.364.534,20
8.562.159,373
8.674.522,08
8.647.421,84
Valores das áreas do pico da cada triplicata dos energéticos
Conforme as informações contidas nos rótulos, a quantidade esperada de cafeína no Red Bull (355 ml) é de 114 mg (0,3211 mg/ml) com concentração de 321,12 ppm. Para essa concentração, foi necessário diluição de ¼ obtendo concentração adequada dentro da faixa de linearidade.
321,1 ppm ÷ 2 = 160,5 ppm ÷ 2 = 80,25 ppm
Assim, a concentração utilizada para ser injetado no HPLC foi de 80,25 ppm.
Substituindo na equação da reta, temos que:
y= 108152x +39183
8.556.875,227 = 108152x + 39183
x = 78,76 ppm
Fator de diluição = 78,76 ppm x 4 = 315,04 ppm
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