A Lactose é um dos alimentos mais consumidos pela população mundial

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3. Materiais

Para a realização deste experimento foi utilizado leite UHT desnatado (Elege), para que o mesmo não interfira na análise do espectrofotômetro, uma vez que gordura pode vir a dar interferência na leitura da amostra e leite desnatado sem lactose. Também foi utilizado a enzima β-galactosidase, mais conhecida como Lactase para a hidrólise da lactose.

Os materiais utilizados para o experimento foram: Erlenmeyer, balão volumétrico, balanças, pipetas, pipetadores, termômetros, banhos termoestatizados, kit glicose peroxidase e espectrofotômetro a 505nm.

4. Métodos

4.1. Doseamento de Glicose em Amostras Puras e nas Diluições

Realizado doseamento em triplicata, de glicose em amostras puras, e em diluições 1:10 e 1:100 e 1:50 de leite desnatado UHT Elegê e em leite desnatado sem lactose, utilizando o kit de determinação de glicose, a fim de determinar a necessidade ou não de diluição prévia do leite para realizar a hidrólise.

4.2. Hidrólise da Lactose e Amostragem

Realizado a hidrólise da lactose no leite, adicionando 2,5 g da enzima lactase em 250mL de leite desnatado UHT Elegê sob agitação constante a 35º C e 5º C por 1 hora e 30 minutos.

Para a amostragem, foi retirado a cada 15 minutos, alíquotas de 10mL e 5mL de amostra, passado para tubos de ensaio, onde foram levados para ser incubados a 95º C, para a inativação da enzima. Em seguida, realizado diluição 1:10 (1mL de leite + 9mL de água) e realizado teste colorimétrico:

Branco

Padrão

Teste (puro)

Teste (diluído)

Reagente Cor

2mL

2mL

2mL

2mL

Solução Padrão

-

20uL

-

-

Amostra

-

-

20uL

20uL

As amostras foram incubadas por 5 minutos a 37º C e em seguidas levadas ao espectrofotômetro. Com o resultado de cada padrão e teste, foi realizado os cálculos de absorbância: [pic 1]

[pic 2] [pic 3]

[pic 4]

5. Resultados e Discussão

5.1 Doseamento de Glicose em Amostras Puras e nas Diluições

A lactose é um dissacarídeo que, quando submetido a ação da lactase, pe quebrado nos monossacarídeos glicose e galactose. Portanto, uma vez que a concentração de glicose é inversamente proporcional a concentração de lactose presente na amostra, nesse experimento, a porcentagem de hidrólise no leite, foi medida pela concentração de glicose (CAMPOS, ET AL, 2009).

Geralmente, a concentração de lactose no leite normal é de 4,8%, e no leite sem lactose pode-se obter um teor de 2,4% de glicose. No presente trabalho, Inicialmente foi realizado o doseamento da glicose contida no leite sem a realização da etapa de hidrólise, e os resultados obtidos foram os seguintes:

Média Padrão

0,435

Diluições

Resultados

Result. Absorb.

X Diluições

1:10

1,073

246,66

2.466,66

1:100

0,029

6,66

Erro

1:50

0,213

48,96

2.448

Com o somatório do resultado da multiplicação das diluições, temos o valor de 2.457,3, que aplicado na fórmula de porcentagem, obtivemos o resultado de 2,45% de glicose presente nas amostras, o que nos mostra que quando há glicose presente no leite, é devido a hidrólise da lactose, o que está presente no leite sem lactose.

5.2 Hidrólise da Lactose

Em nível industrial, sabe-se que a hidrólise da lactose, ocorre geralmente com o leite mantido em refrigeração (2 a 8º C), o que não favorece muito a ação da enzima β-galactosidade, ou seja, a lactase. Mas esse procedimento é o mais antigo e adequado, pois inibe a multiplicação de microorganismos patogênicos e deteriorantes.

A temperatura ótima para a atividade dessa enzima é de 35º C, porém como o leite é um alimento bastante susceptível ao ataque de microorganismos, até mesmo do próprio animal, não se usa essa temperatura para a hidrólise para se obter leite sem lactose.

Esse experimento realizado em aula prática na disciplina de biotecnologia nos proporcionou comparar as duas técnicas de hidrólise, e perceber a velocidade de atividade da enzima exposta em diferentes temperaturas. De acordo com a realização dos procedimentos de hidrólise e seguido de amostragem, pode-se obter os seguintes resultados:

Tempo

% Glicose (37ºC)

% Glicose (7ºC)

0

0,001

0,002

15

0,384

0,19

30

0,785

0,28

45

0,876