Capitulo 6 - Bioquímica

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1. Oxigénio singleto é o oxigênio molecular normal (O2) que tem sido impulsionado em um estado de energia mais elevado e é extremamente reativo.

2. radicais livres superóxido (O2-) são formadas em pequenas quantidades pelos organismos aeróbios; eles são tão tóxicos que a bactéria tem de neutralizá-los com superóxido dismutase. Esta enzima converte os radicais livres superóxido em oxigénio e peróxido de hidrogénio tóxico (que contém o anião peróxido), que por sua vez é convertido em oxigénio e água pela enzima catalase: 2 H2O2 → 2 H2O + O2. Outra enzima que decompõe o peróxido de hidrogênio é peroxidase. Não produz oxigênio: H2O2 + 2 H + → 2 H2O. As bactérias anaeróbias, muitas vezes não é possível neutralizar os radicais livres superóxido que produzem e não toleram o oxigénio atmosférico.

3. O radical hidroxilo (OH?) É formado no citoplasma por radiação ionizante e, como um subproduto da respiração aeróbia. É, provavelmente, a forma mais reativa.

Fatores de crescimento orgânico. Factores de crescimento orgânicos são compostos orgânicos, tais como vitaminas, aminoácidos, e pirimidinas que são necessários para a vida, mas que um determinado organismo é incapaz de sintetizar.

Meios de Cultura

Qualquer material nutriente preparado para o crescimento de bactérias no laboratório é chamado um meio de cultura. Os micróbios que crescem em um recipiente de meio de cultura são referidos como uma cultura. Quando os micróbios são adicionados para iniciar o crescimento, eles são um inóculo. Para assegurar que a cultura irá conter apenas os microrganismos originalmente adicionadas ao meio (e seus descendentes), o meio deve, inicialmente, ser estéreis. Quando é requerido um meio sólido, um agente de solidificação, tais como agar é adicionado. Agar é um polissacárido derivado de uma alga marinha. Poucos micróbios podem degradar agar, por isso continua a ser um sólido. É funde a cerca do ponto de ebulição da água, mas permanece líquido até a temperatura descer a cerca de 40 ° C.

Em um meio quimicamente definido, a composição química exacta é desconhecida.

A maioria das bactérias heterotróficas e fungos são rotineiramente cultivadas em meio complexo, em que a composição química exacta varia ligeiramente de lote para lote. Meios complexos são compostos de nutrientes, como extratos de leveduras, carne, ou plantas, ou digerir proteínas dessas e de outras fontes. Em muitos destes meios de comunicação, as necessidades de energia, carbono, nitrogênio, enxofre e dos microrganismos são em grande parte cobertas por produtos de proteína parcialmente digerido chamados peptonas. Vitaminas e outros factores de crescimento orgânicos são fornecidos por extractos de carne ou extractos de levedura. Tais extratos complementar o nitrogênio orgânico e compostos de carbono, mas, principalmente, são fontes de vitaminas lipossolúveis e minerais. Este tipo de suporte em forma de líquido é o caldo de nutrientes; quando agar é adicionado, é ágar nutriente.

Anaerobic Crescimento meios e métodos

Bactérias anaeróbias obrigatoriamente muitas vezes exigem a redução de mídia para isolamento. Porque o oxigénio pode ser letal, estes meios contêm ingredientes, tais como tioglicolato de sódio, que se combinam quimicamente com oxigénio dissolvido para esgotar o teor em oxigénio do meio de cultura. Anaeróbios obrigatórios podem ser cultivadas na superfície de meios sólidos em atmosferas anaeróbicas produzidas em frascos especiais, em que uma atmosfera livre de oxigénio é gerada por uma reacção química. Também é possível lidar com organismos anaeróbicos em caixas de luvas anaeróbias preenchidos com gases inertes e equipados com armas de luvas de borracha hermético e fechaduras de ar. A nova técnica, em que uma enzima, Oxyrase, é adicionado ao meio de crescimento transforma a placa de Petri (OxyPlate) numa câmara anaeróbia auto-contido.

Técnicas Especiais de Cultura

Algumas bactérias nunca foram cultivadas com sucesso em mídias laboratório artificial; a lepra e sífilis organismos são exemplos. Parasitas intracelulares obrigatórios, como rickettsias e Chlamydia também normalmente não crescer em meios artificiais. Eles, como os vírus, exigem uma célula hospedeira viva. Incubadoras de dióxido de carbono, frascos da vela, e sacos plásticos com geradores de gás químico independentes são usados ​​para crescer bactérias com requisitos especiais de concentração de CO2. Capnophiles são micróbios que crescem melhor em altas concentrações de CO2.

Seletivo e Diferencial de mídia

Os meios selectivos são concebidos para suprimir o crescimento de bactérias indesejáveis ​​e estimular o crescimento dos microorganismos desejados. Antibióticos, concentrações elevadas de sal, ou a elevada acidez pode ser usado. Meios de diferencial fazê-lo mais fácil de distinguir as colónias do organismo desejado, a partir de outras colónias em crescimento na mesma placa. As colónias têm cores diferentes ou diferentes causar alterações no meio circundante. Às vezes, funções seletivos e diferenciais são combinados em um meio.

Enriquecimento Cultura

Porque as bactérias podem estar presentes apenas em pequenas quantidades e pode ser desperdiçada, e porque a bactéria a ser isolado pode ser de um tipo fisiológico incomum, às vezes é necessário recorrer a cultura de enriquecimento, ou mídia enriquecimento. As condições ou único nutriente são projetados para aumentar a um pequeno número de um determinado organismo a um nível detectável.

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A obtenção de culturas puras

Existem vários métodos para o isolamento de bactérias em culturas puras, que contêm apenas um tipo de organismo. Método Streak Plate. Provavelmente, o método mais comum de obtenção de culturas puras é a placa de sequência (Figura 6.1). Uma agulha de inoculação estéril é mergulhado em uma cultura mista e riscado em um padrão sobre a superfície do meio nutriente. As últimas células esfregadas da agulha são largas o suficiente para além de que eles crescem em massas visíveis isolados chamados colônias.

Preservar culturas bacterianas

Em ultra-congelação, uma cultura pura de microrganismos é colocado num líquido de suspensão e ultracongelada a -50 ° a -95 ° C. Em liofilização (secagem por congelação), uma suspensão de micróbios