RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA 4:CULTVO, CRESCIMENTO, ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DEFUNGOS PRESENTES EM DIFERENTES SUBSTRATOS

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de cultura distintos, sendo o primeiro meio de cultura pura e o segundo contendo bactericida (cloranfenicol)

Para a inoculação da amostra em meio de cultura, foi realizada assepsia das mãos, da bancada onde o trabalho foi executado e, durante o processo de inoculação, foi utilizada lamparina acesa para minimizar possíveis contaminações do ambiente.

Os pequenos fragmentos da casca contendo líquens foram dispostos de forma uniforme sobre o meio de cultura, com a região da casca voltada para cima, de forma que o líquen ficasse voltado para o meio de cultura. A placa com o material foi devidamente identificada e deixada em repouso por 7 dias para a proliferação fúngica.

Esta etapa é importante porque os fungos são seres ubíquos que estão em constantes relações com outros microrganismos. Por isso, utiliza-se um meio de cultura nutritivo, com nutrientes que favoreçam a proliferação de espécies distintas de fungos. O meio de cultura escolhido deve englobar a necessidade nutritiva de diversas espécies fúngicas, pois nesta etapa não se sabe qual tipo de fungo irá crescer no meio. Foram realizadas duas culturas, sendo a primeira uma cultura pura e a segunda uma cultura com cloranfenicol, um antimicrobiano, que auxilia o crescimento dos fungos sem a competição de bactérias no meio. Pode haver crescimento de mais de uma espécie na cultura pura. Por isso, utiliza-se uma das colônias para seguir a prática.

ETAPA 2 - ISOLAMENTO DA AMOSTRA FÚNGICAQUE SE DESENVOLVEU NO MEIO DE CULTURA E IDENTIFICAÇÃO DO GRUPO

Nesta etapa, foram utilizados os meios de cultura da etapa anterior para o isolamento do microorganismo em um terceiro meio de cultura. Tal experimento visa a identificação do grupo ao qual o microorganismo está inserido.

Foram utilizados:

 Cultura fúngica obtida da etapa anterior

 Alça inoculadora

 Lamparina

 Meio de cultura

 Álcool 70%

 Azul de algodão

 Lâmina e lamínula

 Microscópio óptico

Primeiramente, realiza-se a assepsia das mãos para que não haja contaminação da amostra.Esta etapa deve ser realizada abraçando a chama da lamparina para criar um ambiente estéril. Seleciona-se uma das colônias crescidas no meio e, utilizando a alça inoculadora, retira-se uma pequena quantidade que é introduzida em um novo meio de cultura. Essa etapa visa isolar a espécie fúngica que se desenvolveu no meio de cultura e expandir a colônia. Identifica-se a placa na região externa e, então, esta é colocada na estufa para favorecer o crescimento do microrganismo. Aguarda-se o período 7 dias. Após este período, segue-se para a identificação do grupo através de microscopia. Seleciona-se uma porção superficial da colônia crescida no meio e com a alça inoculadora, coloca-se o material em uma lâmina. Como o citoplasma das células é transparente, é necessário corar previamente o material a ser analisado. Caso contrário, seria inviável visualizar e identificar os microrganismos presentes. Goteja-se uma gota do corante azul de algodão sobre a amostra que é coberta com uma lamínula.

4-RESULTADOS E DISCUSSÃO

ETAPA 1 - COLETA E INCUBAÇÃO DO FUNGO EM MEIO DE CULTURA:

Conforme esperado, houve crescimento fúngico no meio de cultura. O aspecto e coloração da amostra obtida são sugestivos de uma única espécie fúngica. O crescimento irregular na placa aponta o crescimento de microorganismos paralelamente aos fungos.

ETAPA 2 - ISOLAMENTO DA AMOSTRA FÚNGICAQUE SE DESENVOLVEU NO MEIO DE CULTURA E IDENTIFICAÇÃO DO GRUPO

Após o período de incubação das culturas isoladas cultivadas a partir da amostra obtida na primeira etapa do processo, percebe-se crescimento diferente nas duas placas.

No meio de cultura sem cloranfenicol (antimicrobiano) o crescimento dos fungos ocorre de forma irregular sobre o meio de cultura. Isso porque o meio de cultura permite o crescimento paralelo de outros microorganismos. Portanto, a disposição dos fungos sobre a placa é sugestivo de competição por recursos entre fungos e bactérias. O padrão de crescimento foi radial, do centro da placa para as extremidades.

O segundo meio de cultura apresenta uma melhor disposição e regularidade no crescimento da colônia sobre o meio de cultura. Isso porque a ação do cloranfenicol inibe o crescimento de bactérias que competiriam com os fungos por recursos para sua proliferação, resultando em um melhor desenvolvimento dos fungos.

5 CONSIDERAÇÕES FINAIS

Nesta fase do experimento, ainda não é possível identificar a espécie do fungo coletado. Isso porque os meios de cultura utilizados não favorecem o crescimento de todas as estruturas importantes para a correta identificação da espécie. Para isso, se faz necessário um microcultivo, onde o ambiente permite o crescimento mais completo do fungo em questão, permitindo o desenvolvimento de corpo de frutificação para posterior visualização e identificação da espécie.