PROPRIEDADES DE HEMOGLOBINA VARIANTES MILWAUKEE-I E SUA CARACTERÍSTICA ÚNICA

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As medições foram feitas com o analisador de ultracentrífuga Hitachi, Modelo UCA-IA; e todos os procedimentos para experiências de estabilidade foram realizados como descrito anteriormenteS, 9.

As concentrações de Hb foram medidas pelo método da piridina hemochromogen 1 °, supondo o emi a 556 mp para ser 34,7-

RESULTADOS

Características Espectroscópicas

Espectros de EPR do sangue do doente e do Hb M Milwaukee-z purificado na Fig. I, o espectro EPR do sangue do doente contendo Hb M Milwaukee-I é apresentado, em comparação com o de Hb M Saskatoon e MetHb A. É devido a o ferro heme férrico no anormal / 5 subunidades de Hb M.Milwaukee-i. O espectro é essencialmente o mesmo que o do Hb Milwaukee-I purificado.

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Morrer

FIG. I. Espectros EPR do sangue do paciente contendo Hb M Milwaukee-I (superior), do paciente sangue contendo Hb M Saskatoon (meio) e do MetHb A purificado (inferior). O espectro é semelhante ao do sangue do paciente contendo Hb M Saskatoon, exceto para a absorção em torno de g = 4,3 de Hb M Saskatoon. Há um sinal de duplicação G = 6,0, que é uma característica comum ao sangue do paciente contendo Hb M 11,12. A extensão da divisão do valor de g, entretanto, foi a mais proeminente entre as cinco variantes de Hb M (Tabela I). No meio do sinal de dupleto, houve uma pequena absorção semelhante à de Hb M Saskatoon, cujo valor g é 6.05 e corresponde à de MetHb A. Nos campos magnéticos superiores, também, uma absorção foi observada em g = 1,95.

Efeito da desoxigenação das subunidades a normais no espectro EPR, que é devido ao heme férrico nas subunidades anormais, também foi verificado; há não ocorreu alteração significativa nos valores de g deste espectro por desoxigenação.

Espectros visível do purificada MetHb M Milwaukee-z (ASFE ~ + - ~ ISO / 52 Fe3 + mu)

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PROPRIEDADES DA HEMOGLOBINA M

FIG. 2. espectros visível de MetHb M Milwaukee-l, MetHb M Saskatoon e MetHb A em oi M tampão de fosfato de potássio (pH 7,0). - -, MetHb M Milwaukee-i; - - -, MetHb M Saska-

toon; ....., MetHb A.

FIG. 3. espectros visíveis de HbO2 H Milwaukee-i oi em tampão de fosfato de potássio M (pH 6,5) sob ar e sob pura 0 2 gás. Os espectros a pH 7-9 ou sob ar puro 0 2 gás eram essencialmente o mesmo com o espectro a pH 6. 5 puro sob gás 0 2, - - -, = H HbO Milwaukee-I a pH 6,5 sob ar; - -, HBO 2 M Milwaukee-i em pH 6. 5 sob pura 0 2 gás.

Os de MetHb M Saskatoon e MetHb A. Produziu um espectro que obviamente diferiram de MetHb M Saskatoon e MetHb A, e seus máximos de absorção foram em torno de 500 e 623 jangadas, em contraste com aquelas em torno de 49 ° e 598 m # em MetHb M Saskatoon. Outro máximo de absorção em torno de 54 ° m # observado em MetHb M Saskatoon, que parece corresponder à banda de baixa tensão, foi ligeiramente encontrado em MetHb M Milwaukee-i.

Conforme ilustrado na Fig. 3, o espectro de HbO 2 M Milwaukee-I na gama mais baixa de pH era significativamente diferente no ar do que no gás 02 puro; A intensidade de absorção de as faixas a e fl aumentaram em gás 02 puro. Na gama mais elevada de pH, enquanto que o espectro mudança de HbO 2 M Milwaukee-i dependendo da pressão 02 não foi observada.

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Conforme previsto a partir dos resultados da variação espectral na gama inferior de pH (figura 3), HbO 2 M purificado Milwaukee-i mostrou uma afinidade muito baixa para 02; A posição do curvas foi deslocada para a direita em todas as faixas de pH, em comparação com de Hb A (Fig. 4). A forma das curvas de Hb M Milwaukee-i foi menos sigmóide do que aqueles de Hb A. O valor de n na equação empírica de Hill, uma expressão numérica da interação heine-heine, foram de 1,4-1,6 e parecem ser dependentes do pH (Fig. 5).

O efeito de Bohr, ou seja, o efeito do pH sobre a 02 equilíbrio, foi aparentemente presentes em Hb M Milwaukee-i como mostrado na Fig. 5. E a magnitude desse efeito em Hb M Mil-Waukee-l, em termos de -Alog Pso / ~ JpH a pH 7,4 era 0,94 e era maior do que isso, 0,60, de Hb A.

FIG. 6 mostra as 02 curvas de equilíbrio de Hb A, hemolisado contendo Hb

M Milwaukee-i e Hb M Milwaukee-I purificado a pH 7,0. A partir do cromatograma procedimento, verificou-se que o hemolisado era composto por cerca de 60% de Hb A e 40% de Hb M Milwaukee-i. Com base no pressuposto de que ambas as fracções no hemolisado se comportam independentemente um do outro, a curva para o hemolisado corresponderia à cal-Na Fig. 6. No entanto, a curva observada foi aparentemente diferente da calculado um, mostrando a presença de alguma interação entre a molécula de Hb A e Hb M Milwaukee-i.

O efeito da temperatura sobre a afinidade 02 e n valores do equilíbrio 02

As curvas de Hb A e Hb M Milwaukee-I são mostradas na Fig. 7. Na Hb A, uma mudança de temperatura, obviamente influenciou a afinidade 02, enquanto que n valores permaneceram inalterados. Dentro Hb M Milwaukee-i, no entanto, o efeito da temperatura na afinidade 02 foi quase metade da observada na Hb A. Estas observações sugerem que o calor de oxi- genética é significativamente menor em Hb M Milwaukee-I do que em Hb A. Além disso, pode interessante notar que o valor n das curvas de Hb M Milwaukee-i parece ser temperatura dependente; 1,26 a IO ° e 1,41 a 20 °, respectivamente.

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PROPRIEDADES DA HEMOGLOBINA M

II

Análise para esses fenômenos interessantes está agora em andamento a partir da termodinâmica ponto de vista. Embora esses resultados tenham sido obtidos a 564 m #, houve ligeira transição forma e localização das curvas de Hb M Milwaukee-I de acordo com as outras comprimento de onda utilizado para medições. Mas a extensão dessa transição em Hb M Milwau-Kee-I não foi tão notável como observado em Hb M Hyde Park 12. Assim, o acima mencionado não afetaria nossas explicações dos resultados obtidos.

A análise ultracentrífuga