DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS FUNDAMENTAIS E SOCIAIS

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Findadas as etapas descritas anteriormente, os tubos de ensaio seguiram para o espectrofotômetro, onde foram realizadas leituras de absorbância e anotados os valores obtidos para os respectivos frascos. Foram realizadas 6 leituras obedecendo um intervalo de 5 segundos entre uma leitura e outra, o que totalizou 30 segundos de atuação enzimática monitorada.

Resultados e discussão

A partir da leitura dos dados de absorbância anotados para cada tubo, foi possível construir os gráficos de reação enzimática (quantidade de produto formado em função do tempo) e da velocidade da reação: [pic 2]

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[pic 5][pic 6][pic 7]

Podemos ver que V0 aumenta até atingir um patamar. A partir daí, V0 não se modifica muito, mesmo que sejam adicionadas quantidades crescentes de substrato. Esse comportamento característico do gráfico é reflexo da aproximação da velocidade máxima da reação (Vmáx), uma situação em que todas as enzimas estão com substratos ligados em seus sítios ativos, formando o complexo enzima-substrato (ES).

Por causa de sua natural habilidade em mudar de cor, o guaiacol é usado como indicador em vários experimentos envolvendo enzimas. Já o peróxido de hidrogênio é utilizado nesta prática como o substrato ao qual a enzima peroxidase se ligará.

Conclusão

O gradativo escurecimento do conteúdo dos tubos de ensaio causados pela atividade da peroxidase sobre o óxido de hidrogênio (H2O2) ao longo dos 30 segundos de experiência monitorados através do espectrofotômetro e posterior utilização dos dados obtidos na experiência para a plotagem dos gráficos serviu para percebermos na prática a aplicação da equação de Michaelis-Menten e inferirmos acerca aspectos qualitativos e quantitativos da experiência não explícitos no roteiro, como por exemplo, a velocidade da reação e a quantidade de produto formado em determinado intervalo de tempo.

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REFERÊNCIAS

CANO, M.P.; ANCOS, B.; LOBO, G. Peroxidase and polyphenoloxidase activities in papaya during postharvest ripening and after freezing/thawing. Journal of Food Science, v. 60, p. 815-820, 1995.

BRAVERMAN, J.B.S. Vitaminas. In: Introduction a la bioquímica de los alimentos. Barcelona: Omega, 1967. cap. 14, p. 206-239.

LEHNINGER, Albert L. Bioquímica; São Paulo: Editora Edgard Blucher LTDA,1976