DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS FUNDAMENTAIS E SOCIAIS ATIVIDADE ENZIMÁTICA

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Preparo das diferentes concentrações do substrato:

[pic 2]É utilizada uma solução de guaiacol à 12 molar, em seguida enumerados 7 tubos de ensaio em sequência, 17 – 33 – 83 – 167 – 250 – 333 e 500 µL da solução inicial de guaiacol. Depois é completado o volume dos tubos de ensaio para 1 ml, adicionando aos tubos de ensaio contendo o guaiacol, 983 – 967 – 917 – 833 – 750 – 667 e 500 µL de água destilada

Preparo da mistura de ensaio:

1 – Foram enumerados os 7 tubos de ensaio e transferidos 1,5 mL do tampão (fosfato de potássio) 100mM (pH 7,0) em temperatura ambiente, para cada tubo.

2 – Adicionou-se 0,1 mL da solução de guaiacol, obedecendo a ordem numérica (do primeiro tubo ao último, em sequência) em cada tubo.

3 – Foi acrescentado 0,2 mL da solução de peróxido de hidrogênio 0,5 M em cada tubo

4 – Por fim, foi adicionado 0,2 mL do extrato enzimático em um tubo de cada vez, que foram agitados e em seguida foi iniciada as leituras.

[pic 3]

Monitoramento da reação:

1 – O espectrofotômetro estava calibrado com água destilada à 470 nm

2 – Após a adição do extrato enzimático ao tubo, foi agitado e colocado na cubeta, onde foram anotados os valores de absorbância a cada 5 segundos durantes 30 segundos.

3 – Colocando os tubos de ensaio no banho maria, foi possível observar a reação e o seu resultado final em cada amostra com concentrações de substrato diferentes

4 – RESULTADOS E DISCUSSÕES:

Com a metodologia seguida de modo correto, foram obtidos bons resultados. Quanto maior a quantidade de substrato, mais rápido a reação acontece, nos tubos em que apresentavam soluções com maior concentração, foi possível observar a ação enzimática da peroxidase de forma mais rápida e ágil, apresentando diferentes colorações

Figura 1: Variação de cor nos tubos com sete concentrações diferentes.

[pic 4]

Figura 2: Gráfico da Influência da concentração na formação do produto

[pic 5]

A equação de Michaelis–Menten descreve como a velocidade de reacção v0 depende da posição do equilíbrio ligado ao substrato e da constante de velocidade k2. Michaelis e Menten mostraram que se k2 for bem menor que k-1 (chamada a aproximação de equilíbrio), pode obter-se a seguinte equação (MICHAELIS,1913):

[pic 6]

No cálculo do Km, quanto menor o valor de Km obtido, maior será a afinidade da enzima pelo substrato, consequentemente reação ocorrerá livremente até que a oferta de substrato no meio, seja totalmente utilizado.

Figura 3: Vo em relação à concentração do substrato

[pic 7]

Ocorrerá uma variação na velocidade da reação dependendo da concentração de substrato no meio. Quanto menor a concentração de substrato, menor será a velocidade da reação e maior será seu Km, ao contrário de quanto maior a concentração de substrato, maior será a velocidade da reação e menor será o Km.

5 - CONCLUSÃO

Conclui-se que a atuação da enzima sobre o substrato ocorreu de forma satisfatória, porque os resultados e a constante enzimática expressaram resultados positivos, o que nos mostra a ação da Peroxidase sob a ativação da enzima no abacaxi como o principal fator na oxidação do fruto.

6 – REFERÊNCIAS

CLEMENTE, E.; PASTORE, G. M. Peroxidase and polyphenoloxidase, the importance for food technology. Ciênc. Tecnol. Aliment., Campinas, v. 32, n. 2 p. 167- 171, 1998.

GASPAR, T.H.; PENEL, C.L.; THORPE, T.; GREPPIN, H. Peroxidases: a survey of their biochemical and physiological roles in higher plants. Genève: Université de Genève, 1982. 324p.

MICHAELIS, L., Menten M.L. Kinetik der Invertinwirkung Biochem. Z. 1913; 49:333–369

SOUZA, J. da. S.; SOUZA, L. F. da. S. Aspectos econômicos. In: REINDHARDT, D. H., SOUZA, L. F. da. S.; CABRAL, J. R. S. (Org.). Abacaxi. Produção: aspectos técnicos. Cruz das Almas: Embrapa Mandioca e Fruticultura; Brasília, DF: EMBRAPA

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