Quantificação de Carboidratos pelo Método do DNS

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identificados. Logo após, procedemos com a dosagem de açúcares pelo método DNS, onde foi adicionado 1 mL de DNS às amostras já colocadas nos tubos e levamos ao banho-maria por 5 minutos. Após atingir a temperatura ambiente, completamos com 13 mL de água destilada. Por estar muito diluída, para fazer a leitura das amostras, as mesmas precisaram ser diluídas. As amostras foram diluídas transferindo pra outros tubos de ensaio 7mL de cada amostra e adicionados 7 ml de água destilada em cada tubo. As amostras foram lidas no espectrofotômetro a 540nm. Apesar da diluição, as amostras B e C continuaram concentradas e foram diluídas novamente, ou seja, 7 mL dos diluídos de ambas amostras foram transferidos para outros tubos de ensaio contendo 7 mL de água destilada cada um. Os diluídos foram lidos no mesmo comprimento de onda e as absorvâncias anotadas.

Açúcares redutores totais

O melaço da cana de açúcar contém (em sua maioria) sacarose, frutose e glicose. A glicose e a frutose foram determinadas como descrito acima através do DNS. Por não ser açúcar redutor, a sacarose não foi quantificada acima.

Para isso, adicionou-se 10 mL do melaço em um balão volumétrico de 500mL, sendo adicionado posteriormente 70 mL de água destilada. A solução diluída foi colocada em balão volumétrico até atingir 65oC. Após atingida essa temperatura, o balão foi retirado do banho e adicionou-se, imediatamente depois, 25 mL de HCl 1:1; o ácido foi adicionado para hidrolisar a sacarose, levando a conversão aos seus monossacarídeos (frutose e glicose) que serão dosados. Após a adição do ácido, a solução foi homegenizada e deixada em repouso em temperatura ambiente por 30 minutos. Após esse tempo, volume do balão foi completado com água destilada e a solução foi homogeneizada.

Foram transferidos respectivamente 2 (A), 10 (B) e 25 (C) mL da solução do balão para um novo balão, agora de 100ml, que teve seu volume completado com solução de NaOH 0,1M.

Os procedimentos subsequentes foram realizados assim como na quantificação dos açucares redutores. Contudo, a solução A não precisou ser diluída enquanto a solução B foi diluída uma vez (7 mL de solução e 7 mL de água) e a solução C foi diluída duas vezes – ou seja, transferiu-se 7 mL do diluído para um novo tubo adicionando a ele mais 7 mL de água destilada). As soluções foram lidas no espectrofotômetro a 540 nm.

TRATAMENTO DE DADOS

Curva padrão

Os seguintes valores de absorvância foram obtidos (Tabela 2), permitindo a obtenção de uma curva padrão através de regressão linear (Figura 3).

Tabela 2 - Leituras de absorvância obtidas para preparo da curva padrão

[glicose] (umol/mL)

1 1,0

2 2,0

3 3,0

4 4,0

5 5,0

Absorvância média

0,2005

0,3940

0,5430

0,6675

0,7815

0,9

R2 = 0,9879

y = 0,1436x + 0,0866

0,675

0,45

0,225

0

0 1,25 2,5 3,75 5

Figura 3 - Curva padrão para calculo de concentração de açucares redutores em solução.

Cálculo de açúcares redutores

Para as amostras A, B e C, foram obtidos os valores de absorvância de 0.453, 0.586 e 0.549, respectivamente. Utilizando a curva padrão, as leituras de absorvância e considerando as diluições realizadas, obteve-se uma concentração média de 4.86 mmol/ mL.

Cálculo de açúcares redutores totais

Para as amostras A, B e C, foram obtidos os valores de absorvância média de 0.404, 0.721 e 0.749, respectivamente. Utilizando a curva padrão, as leituras de absorvância e considerando as diluições realizadas, obteve-se uma concentração média para o conteúdo do balão de 500 mL de 1.36 mmol/mL, assim, a concentração de açúcares totais encontrada no melaço é de aproximadamente 68.00 mmol/mL.

CONCLUSÃO

O método DNS utilizado se mostrou efetivo através da construção da curva padrão, apresentando um coeficiente de correlação próximo de 1. Assim, com base em concentrações conhecidas de glicose, foi possível estimar o teor de açucares redutores e açucares redutores totais da amostra. Como esperado, os valores encontrados antes da hidrólise ácida da sacarose são mais baixos do que os que foram observados após a clivagem das ligações glicosídicas.

A diferença se dá pelo fato de que todos monossacarídeos são capazes de sofrerem oxidação na presença de certos agentes, enquanto ligações O-glicosídicas que envolvem carbonos anoméricos impedem a mesma reação. Também é possível observar resultados discrepantes para a primeira quantificação que podem ser explicados por erros de execução nas diluições, assim, torna-se necessário que o experimento seja repetido para melhores resultados.

QUESTÕES

Pesquisar outras metodologias para quantificação de açúcares.

Segundo SILVA et al. (2003), os métodos mais comumente utilizados para medição de açúcares são a refratometria em escala Brix (método refratométrico), Somogyi-Nelson, fenol-sulfúrico (métodos espectrofotométricos) e Lane-Eynon (método titulométrico também conhecido como reação de Fehling). O refratômetro mede desvios de feixes de luz e retorna um valor de índice de refração, que é comparado com um padrão, previamente calibrado particular de cada amostra. A técnica Somogyi-Nelson (SN) é aplicada para preparar amostras e analisá-las em espectrofotômetros. A determinação é feita através da absorbância de um complexo colorido formado entre um açúcar, cobre oxidado e arsênio-molíbdico. O método do Fenol-sulfúrico (FS) resume-se à desidratação