Doença de Alzheimer (AD)

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reconhecimento de constituintes proteicos da cápside, perda do revestimentoe a entrega de genoma viral ou por meio de endocitose,tráfico intracelular e processamento (Sun et al. 2013).

Os membros da família de adenovirus sem envelope ligar-se a uma variedade de receptores celulares, dependendo do seu metas (Cupelli e Stehle 2011;. Nemerow et al 2012; Russell 2009; Smith et ai. 2010).

Wozniak et al. (2007) relataram que o HSV-1 e infecções por CMV está associado ao acúmulo de Ab de péptidos em células. Além disso, esses autores demonstraram que os tratamentos anti-virais podem ser usadas para reduzir a formação de péptidos Ab em HSV-1 infectadas células (Wozniak et al., 2011), possivelmente, abrir um antiviral abordagem para a terapia clínica de AD (Itzhaki e Wozniak 2012). No que diz respeito a um papel fisiológico de Ab péptidos, recentemente, tem sido relatado que eles possuir propriedades antimicrobianas que são uma reminiscência do péptido antimicrobiano humano arquétipo (AMP) LL-37 (Soscia et al. 2010). O relatório mostrou que Ab péptidos apresentou actividade de AMP equivalente ou, em

alguns casos, superior a IL-37 contra um número de bactérias e leveduras clinicamente relevantes. Além, homogeneizados de cérebros com AD tinha um antimicrobiano semelhante actividade, sugerindo que os péptidos Ab pode realizar alguma função protectora essencial no cérebro. Curiosamente, enquanto a preparar o nosso manuscrito, uma recente relatório também mostrou que os péptidos exibidos Ab antiviral actividades contra o vírus A da gripe envelopado (White et al. 2014). Tomados em conjunto, estes resultados suportam a noção Ab que os péptidos podem ser agentes antimicrobianos naturais, particularmente no cérebro humano, secretado por neuronal células em resposta a infecções de agentes patogénicos (Piacentini et ai. 2014). Nossas observações atuais estender o achados de peptídeos Ab como AMP, que incluem actividade antiviral contra envolto HSV-1, mas não contra sem envelope adenovírus humano. Nós propomos um mecanismo de acção antiviral para peptídeos AB e

sugerir possíveis ligações entre HSV-1 infecção e

latência, peptídeos Ab e a forma esporádica da DA.

materiais e métodos

MRC-5, A549 e H4 culturas de células

células MRC-5 e A549 foram obtidas a partir de diagnóstico

Hybrids (Athens, OH). As células H4 veio do

Colecção Americana de Culturas Tipo (Manassas, VA).

As células foram cultivadas em Eagle modificado por Dulbecco

Médium (DMEM) suplementado com 10% de fetal

de soro de bovino (FBS), penicilina G (2,5 UI / ml) e

estreptomicina (50 lg / ml). Soro e antibióticos foram

de Wisent Bioproducts (St-Bruno, QC). culturas

Foram deixada atingir a confluência antes do uso.

vírus

HSV-1 foi um isolado obtido a partir do clínico

microbiologia e virologia laboratório do Centro

Hospitalier Universitaire de Sherbrooke (CHUS). A

inoculo de HAd5 foi obtido a partir da American

Type Culture Collection.

peptídeos

Sintético Ab 1-40, 1-42 Ab, Ab mexidos 1-40,

mexidos Ab 1-42 e antimicrobianos LL-37 peptídeos

foram obtidas a partir de Anaspec (Fremont, CA). Todos

péptidos foram utilizados a uma concentração de 20 lg / ml.

As sequências de aminoácidos de péptidos são ilustrados na

Tabela S1 (Informação de apoio).

Viabilidade celular

A viabilidade celular foi determinada utilizando o azul de tripano

método de exclusão de células. Uma solução (0,04% w / v) de

Azul de tripano foi comprada na Life Technologies

Inc. (Burlington, ON).

tratamentos com células com b-amilóide peptídeos, vírus

e o isolamento do DNA

MRC-5, células A549 e H4 cultivadas em DMEM (100 LL)

em placas de 96 poços foram tratadas sob diferentes condições.

HSV-1 e HAd5 foram tituladas por diluição em ponto final com

MRC-5 e células A549 com diluições em série de cada vírus

em placas de 96 poços. Com base nesta titulação, as células eram

infectados em todas as experiências a uma razão de 0,01 ID50 por célula.

As células foram tratadas com Ab 1-40, 1-42 Ab, Ab mexidos

1-40, 1-42 mexidos Ab, ou LL-37 peptídeos e exposto

para o HSV-1 ou HAd5, tal como descrito nas legendas da

Figuras. a replicação do ADN virai foi parada por congelamento

a suspensão de células 24 h (HSV-1) ou 48 h (HAd5) pós

infecção. O DNA foi extraído com um protocolo in-house

utilizando a lise alcalina e precipitação com etanol. alíquotas

(1 ll) foram amplificadas por PCR em tempo real (qPCR), sem

a purificação para detecção do DNA viral e b-actina.

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