As Pectinases são enzimas que catalisam a hidrólise de substâncias pécticas presentes nas células vegetais

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Para determinar a atividade de pectina liase foi adicionado em um erlenmeyer 10,0 mL do extrato bruto e 10,0 mL de pectina cítrica 0,5% em tampão acetato de sódio 0,05M com pH 4,5 e incubou-se em banho-maria a 40 °C por 60 min (SANTI, 2005). Após, foi pipetado alíquotas de 3,0 mL da mistura nos tempos de 30 e 60 min e transferidas 1 mL para tubo de ensaio, 1,75 mL de HCl 0,5M, para a realização da leitura.

A absorbância foi medida em espectrofotômetro em comprimento de onda de 235 nm contra o branco (ALBERSHEIM & KILLIAS, 1962). O coeficiente de extinção molar utilizado para cálculo foi ε235nm = 5550 M-1cm-1 (UENOJO & PASTORE, 2006). Considerou-se uma Unidade enzimática (U) como a quantidade de enzima necessária para produzir 1 μmol de ácido galactourônico mL-1.min-1 nas condições do ensaio (U= μmol.mL-1.min-1).

RESULTADOS E DISCUSSÃO

No cultivo das duas linhagens de forma mista, a maior produção de pectina liase foi 20,99 U.m.L-1 com pectina cítrica como fonte indutora no tempo 96h. Enquanto o menor resultado obtido foi 5,82 U.mL-1, no tempo de 24h, com a polpa de buriti como fonte indutora. A avaliação da atividade enzimática nos tempos de 24h e 48h de incubação, apresentam produção enzimática igual para as duas fontes indutoras. Observou-se que produção enzimática começou a mudar após 72h de incubação, pois o meio com pectina cítrica houve um aumento gradual, já o meio com a polpa de buriti sofreu diminuição na produção. (Figura1).[pic 1]

Comparando o presente estudo com o de Camargo (2005), que utilizou bagaço de laranja como fonte de carbono para produção de pectina liase por Aspergillus sp., obteve atividade enzimática de 11,30 U.mL-1, valor próximo ao encontrado com polpa de buriti como indutor no tempo de 48h de incubação, que teve a atividade enzimática de 11,06 U.mL-1. Segundo BUENO et al. (2005) a produção dessas enzimas para fins industriais é feita principalmente por Aspergillus niger, entretanto, os níveis de atividades enzimáticas dependem das fontes de carbono utilizadas na produção. No presente estudo, o cultivo misto em polpa de buriti mostrou-se promissor indutora de pectina liase para o cultivo misto.

Patil (2006) também encontrou valores parecidos para produção de pectinases por diferentes linhagens de Aspergillus niger. Atualmente, existem diversas técnicas utilizadas para aumentar a produção de pectina liase por fungos filamentosos, entre elas a obtenção de cepas recombinantes contendo em seu material genético com cópias adicionais do gene referente à produção dessa enzima (GONÇALVES et al., 2012).

Outra variável analisada foi o pH final, do caldo de cultivo com polpa de buriti e pectina cítrica, que amostrou-se mais ácido quanto maior era o período de incubação. Para a polpa de buriti no tempo de 24h o pH foi de 3,45, já com 96 horas de incubação o pH do meio caiu para 2,09, o mesmo observou-se para o meio contendo pectina cítrica, no tempo de 24h o pH era de 2,74 e com 96h caiu para 2.33 (Figura 2). Isso pode ser pela saturação do meio de cultura, pois no estudo Farias (2015), onde analisou-se o pH ótimo para produção de pectina liase em polpa de buriti como fonte indutora, maior atividade enzimática foi de 0,76 U.mL-1 em pH 6[pic 2]

Já a biomassa final, para a polpa de buriti a partir do tempo de 48h permaneceu estável com 4,8 mg.mL-1, ou seja quando alcançou o ápice da produção enzimática não apresentou aumento significativo na massa micelial, ao contrário da pectina cítrica que apresentou um aumento no decorrer do tempo (Figura 3).[pic 3]

Observou-se uma correlação entre a Bioma final, Atividade enzimática e o Tempo neste estudo, pois na medida que o Tempo aumentou, tanto a biomassa final quanto a atividade enzimática aumentam, isto é nítido quando observa-se os resultados da pectina cítrica como indutora, que foi utilizada como controle.

CONCLUSÕES

O cultivo de linhagem mista com a polpa de buriti como fonte de carbono, mostrou-se promissora para produção da enzima pectina liase, uma vez que atividade enzimática foi de 11,06 U.mL-1, no tempo de 48h. Este valor é considerado alto quando comparado a outros estudos e interessante, uma vez que atualmente procura-se substâncias indutoras de enzimas com baixo custo de mercado e fácil acesso.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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