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Efeito do pH na Atividade de Enzimas Catalíticas

Por:   •  16/3/2018  •  1.164 Palavras (5 Páginas)  •  367 Visualizações

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Feito isso, o espectrofotômetro foi calibrado, ajustando o zero de absorbância com a solução do tubo “branco” e mediu- se a absorbância dos tubos teste e controle a 620 nm.

IV. Resultados:

A absorbância das amostras medidas no espectrofotômetro a 620 nm foi:

Efeito do pH na Atividade da α-Amilase Bacteriana

Tampões

Abs 620 nm

Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 2,6

1,717

Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 3,0

1,842

Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 4,0

1,306

Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 5,0

0,331

Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 6,0

0,090

Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 7,0

0,105

Borato 0,1 Mol/L pH 8,0

0,247

Borato 0,1 Mol/L pH 9,0

0,358

Borato-NaOH 0,1 Mol/L pH 10,0

0,843

Borato-NaOH 0,1 Mol/L pH 11,0

0,631

Tubo controle

2,130

Para calcular os valores de atividade de α-amilase (U/mL de enzima comercial) foi utilizada a seguinte fórmula:

Atividade = Unidade ÷ 0,001 de absorbância ÷ 5 min ÷ 0,1mL x fator de diluição

Dado que:

- O fator de diluição utilizado peço grupo 4 foi de 1:12

- Unidade= Controle – Absorbância

Para o cálculo da atividade relativa foi feita uma regra de três, em que a atividade de α-amilase encontrada é 100% e a absorbância medida é x %.

Exemplo: Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 2,6

68,83 --------- 100%

1,717 --------- x

x= 2,494 %

Fazendo-se os cálculos, foram obtidos os valores que estão expostos na tabela a seguir:

Efeito do pH na Atividade da α-amilase bacteriana

Tampões

Abs 620 nm

Unidades de Atividade de α-amilase (U/mL de enzima comercial)

% Atividade Relativa

Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 2,6

1,717

68,83

2,494

Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 3,0

1,842

48,00

3,837

Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 4,0

1,306

137,33

0,951

Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 5,0

0,331

299,83

0,110

Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 6,0

0,090

340,00

0,026

Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 7,0

0,105

337,50

0,031

Borato 0,1 Mol/L pH 8,0

0,247

313,83

0,078

Borato 0,1 Mol/L pH 9,0

0,358

300,33

0,119

Borato-NaOH 0,1 Mol/L pH 10,0

0,843

214,50

0,393

Borato-NaOH 0,1 Mol/L pH 11,0

0,631

249,83

0,252

Tubo controle

2,130

0

0

A seguir, está o gráfico de atividade relativa x pH:

[pic 1]

V. Discussão:

O pH ótimo de atividade da α-amilase bacteriana oscila entre 4,0 e 7,0(INSUMOS, 1998).O pH encontrado no experimento não se encontra na faixa do pH esperado, pois esse valor foi pH=3,0. No gráfico, trata-se do ponto experimental, cuja atividade relativa é máxima.

Esse ponto foi determinado ao medir as absorbâncias dos tubos, calculando as unidades de α-amilase de cada um e suas atividades relativas. O pH=3, apresentou a maior atividade relativa, sendo este o pH ótimo de reação da α-amilas. Os tubos ficaram com diferentes

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