ANÁLISE QUALITATIVA DE PROTEÍNAS: MÉTODO DO BIURETO

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Tubo 1

Água destilada

Controle negativo

Tubo 2

Glicose 0,1m

Carboidrato

Tubo 3

Clara de ovo 5%

Menos concentrada

Tubo 4

Clara de ovo 20%

Mais concentrada

Tubo 5

Carne

Actina e miosina

Tubo 6

BCAA 0,5%

3 aminoácidos livres não reage

Tubo 7

Leite

Cadeina e miosina

Tubo 8

Saliva in natura

Amilase

DESNATURAÇÃO ENZIMÁTICA

1. Fundamentos

A desnaturação protéica é a perda de atividade biológica de uma proteína devido à ruptura das interações intermoleculares que permitem seu enovelamento, mantendo-a na forma nativa. Os principais agentes desnaturantes são: temperatura, pH, adição de solventes orgânicos.

2. Objetivo

Verificação da desnaturação da enzima amilase salivar por alteração de pH e elevação da temperatura.

3. Material

- Tubos de ensaio

- Pipetas de 5mL

- Pipetas de 2 mL

- Banho-maria a 37ºC

- Banho-maria a 100ºC

4. Reagentes

- Água destilada

- Solução de amido 1%

- Saliva in natura

- HCl 0,1M

- Lugol

5. Procedimento

Numerar 4 tubos de ensaio e adicionar em cada tubo:

- 0,5 mL de água destilada;

- 0,5 ml de saliva in natura ( contendo a enzima amilase salivar);

3) 0,5 mL de saliva in natura (contendo a enzima amilase salivar), e imediatamente após pipetagem, incubar no banho-maria a 100ºC por 5 min.

4) 0,5 mL de saliva in natura (contendo a enzima amilase salivar), e imediatamente após pipetagem, acrescentar 0,5 mL de HCl 0,1M.

Após o tempo de incubação do tubo 3 no banho-maria, acrescentar em todos os 4 tubos, 0,5 mL de amido 1% e incubar os tubos em banho-maria a 37ºC por 10 min. Após o tempo de incubação, adicionar 2 gotas do reativo lugol. Observar e anotar o que ocorreu.

6. Resultado

Tubo 1

0,5ml de água destilada

Roxo

Tubo 2

0,5ml de saliva in natura

Amarelo/Alaranjado

Tubo 3

0,5ml de saliva in natura em banho- maria a 100ºC

Roxo

Tubo 4

0,5ml de saliva in natura com 0,5ml de HCL 0,1m

Roxo

7. Conclusão