REAÇÕES QUALITATIVAS PARA IDENTIFICAÇÃO DE AMINOÁCIDOS E PROTEÍNAS

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em solução. Esse produto formado reage com os íons mercúrio (I) e (II), na solução e formam um precipitado vermelho ou uma solução vermelha, ambos são resultados positivos. Proteínas que contêm tirosina forneceram um resultado positivo. Entretanto, algumas proteínas que contêm tirosina formam inicialmente a um precipitado branco, que quando aquecidos tornam-se vermelhos imediatamente. Ambos os resultados são considerados positivos. Deve-se atentar que alguns combinam com um grupamento fenólico dando um teste positivo, assim devem estar certos que a amostra que se está testando não contem nenhum fenol, à excepçãodaqueles presença na tirosina (Milio&Loffredo, 2007).

Teste Hopkins-Cole é específica para a quantificação do aminoácido triptofano, somente aminoácidos que contêm um grupamento indólico. O anel indólico reage com o ácido glioxílico na presença de um ácido forte para formar um produto cíclico violeta (Figura 13).

Figura 4 Reação do teste de Hopkins-Cole. Fonte: Milio&Loffredo (2007).

O enxofre que nas proteínas se apresenta na forma de grupos sulfidrilas ou dissulfetos (cisteína e cistina), em meio alcalino e a quente liberam o enxofre que aparece na forma de sulfeto de sódio (Na2S). Este reage com acetato de chumbo (CH3COO)2Pb, formando o sulfeto de chumbo (PbS).

O enxofre da metionina não é lábil em meio alcalino. Um precipitado fino castanho ou preto, de sulfeto de chumbo, indicará a presença de cisteína ou cistina.

Procedimento Experimental:

Reação da Biureto: Em dois tubos de ensaio (numerados 1 e 2) foram colocados 10 gotas da solução de proteína (albumina) 10mg/mL e 10 gotas de glicina, respectivamente. Após isso acrescentou -se aos tubos 5 gotas da solução de NaOH 2,5N e 5 gotas de CuSO4 1%. Os resultados obtidos foram interpretados e anotados.

Reação da Ninhidrina:Em dois tubos de ensaio (numerados 1 e 2) foram colocados 5 gotas da solução de proteína (albumina) 10mg/mL e 10 gotas de água destilada, respectivamente. Após isso acrescentou -se aos tubos 3 mL da solução de Ninidrina 0,1% (em tampão fosfato pH 7,0). Os tubos foram fervidos por aproximadamente 2 minutos em banho –maria. Os resultados obtidos foram interpretados e anotados.

Reação Xantoprotéica: Em quatro tubos de ensaio (numerados de 1 a 4) foram colocados 10 gotas de Proteína, Tirosina, Triptofano e Fenilanina respectivamente. Após isso acrescentou-se aos tubos 0,5mL de HNO3 conc., ferveu-se os tubos por 1 minuto, e depois acrescentou-se 2mL de NaOH 20%. Os resultados obtidos foram interpretados e anotados.

Reação da Millon:Em três tubos de ensaio (numeradosde 1 a 3) foram colocados 10 gotas da solução de proteína (albumina) 10mg/mL , 10 gotas de Triptofano e 10 gotas de Tirosina, respectivamente. Após isso acrescentou -se aos tubos 2 gotasdo Reagente de Millon (HNO3 e Hg). Os tubos foram fervidos por aproximadamente 2 minutos em banho –maria. Os resultados obtidos foram interpretados e anotados.

Reação de Hopkins-Cole: Em três tubos de ensaio (numeradosde 1 a 3) foram colocados 10 gotas da solução de proteína (albumina) 10mg/mL , 10 gotas de Triptofano e 10 gotas de Tirosina, respectivamente. Após isso acrescentou -se aos tubos 10 gotas da solução de Hopkins-Cole. Misturou-se e deixou-se escorrer pela parede do tubo 1mL de H2SO4 e agitou-se lentamente. Os resultados obtidos foram interpretados e anotados.

Reação para Aminoácidos Sulfurados: Em três tubos de ensaio (numeradosde 1 a 3) foram colocados 10 gotas da solução de proteína (albumina) 10mg/mL , 10 gotas de Cisteína e um fio de cabelo, respectivamente. Após isso acrescentou-se aos tubos 20 gotas da solução de NaOH 2,5N. Os tubos foram fervidos por aproximadamente 2 minutos em banho –maria. Os resultados obtidos foram interpretados e anotados.

Resultados e Discussões:

A reação do biureto-o NaOH, presente em solução, conduz a cadeia peptídica a um desarranjo em sua estrutura tridimensional. Os íons Cu2+ presentes em solução, originados do sulfato de cobre, formam um complexo com os aminoácidos, estabelecendo interações com os átomos de nitrogênio da cadeia peptídica. Esse complexo formado confere uma coloração púrpura característica a solução.

Esta reação é positiva para proteínas e peptídeos com três ou mais resíduos de aminoácidos. A reação também é positiva para substâncias que contenham dois grupos carbamínicos (-OC-NH2-) ligados diretamente ou através de um único átomo de carbono ou nitrogênio. A de proteína, quando submetida à reação do biureto, apresentou coloração púrpura, indicando a provável presença de peptídeos em solução. A solução de água destilada submetida ao mesmo procedimento apresentou coloração azul clara, provavelmente devido à alcalinização do sulfato de cobre.

A reação da Ninhidrina-ocorre no tubo 1 por causa da presença do grupo amino livre nas soluções utilizadas, havendo esse grupamento, há a formação de um composto roxo, que pode ser mais ou menos intenso dependendo das concentrações dos aminoácidos presentes, sendo esta uma reação positiva (geral). Já no tubo 2, ocorreu a formação de um composto amarelado, o que indica que a reação foi negativa (específica), pois envolve apenas o grupo que caracteriza o aminoácido, como por exemplo a hidroxiprolina.

Os resultados obtidos na experiência foram os esperados. A formação decompostos de cor roxa/ violeta chamam–se reações positivas ou reações gerais, pois ocorrem sempre que há a relação de Ninidrina com grupamentos carboxila ou amina. Quando há a formaçãode compostos amarelados, é sinal de que a reação ocorrida foi 34 negativa ou específica, isso significa que ocorre apenas entre a Ninidrina e o grupo que caracteriza o aminoácido, como por exemplo, a prolina ou hidroxiprolina.

A reação Xantoprotéica- No tubo 1 obtivemos a coloração alaranjada, porem com pouca intensidade, já que na proteína encontramos poucos anéis aromáticos. No tubo 2 e tubo 3 obtivemos coloração intensa, já que são aminoácidos com presença de muitos anéis aromáticos. Já no tubo 4 quatro não observamos mudança de coloração, logo concluímos que não há presença de anéis.

A reação de Millon-Quando aquecido o tubo 1 o qual continha a proteína, observou-se que a substância adquiriu uma coloração alaranjada/salmão, devido ao fato de que o aquecimento dos fenóis presentes na tirosina fez com que estes sofressem nitração, tendo havido desnaturação da proteína. No tubo 2 o teste também deu positivo já que o teste de millon reage justamente com a tirosina,