COLORAÇÃO DE PANOTICOS E CONTAGEM DE LINFOCITOS

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- MATERIAIS UTILIZADOS

- 02 Lâminas de vidro;

- 01 Pipeta automática;

- 01 Papel toalha;

- 01 Microscópio óptico

- 03 Corante;

- 01 Tubo de ensaio contendo sangue humano.

- PROCEDIMENTO

Pipetou-se 20µl da amostra do material biológico e colocou na lâmina de vidro limpa. Uma segunda lâmina de vidro é colocada sobre o material biológico e puxa a amostra no sentindo contrario para que no final a primeira lâmina encontra-se com o material biológico homogêneo e com uma franja no final.

Em seguida é preciso esperar o material biológico secar sobre a lâmina de vidro para que assim possa ser realizado o esfregaço com a coloração de três corantes.

Após a secagem segue-se para o esfregaço no primeiro corante, no qual mergulha a lâmina dez vezes dentro do primeiro corante de cor esverdeada e seca a lâmina suavemente sobre o papel toalha e passar para o segundo e terceiro corante e repetir o que foi feito no primeiro. Em seguida lavar a lâmina com um pequeno jato de água.

A secagem deve ser suavemente, apenas para retirar o excesso dos corantes para que não haja estrago da amostra.

O próximo passo é esperar a lâmina secar para poder levar a lâmina ao microscópio para identificação das células do sangue. No microscópio a primeira leitura é feita na objetiva de 10% e a segunda leitura na objetiva de 40%, onde pode observar com melhor clareza os leucócitos.

Para a contagem de linfócitos, em um tubo pipetou-se 4 mL de liquido de Gower, e 20 μL de sangue total, homogeneizando com cuidado para que não ocorresse lise das hemácias. Na câmara de Neubauer, colocou-se a lamínula especial para o procedimento e mais uma vez com aulixio da pipeta, usou-se novamente 20 μL da solução antes preparada, sendo esta adicionada entre a câmara e lamínula, tomando o devido cuidado. Esta foi então para a microscopia, observando primeiro os quadrantes maiores da câmara, até chegar ao desejado, começando a contagem pelos 4 extremos e o meio, é feito então o calculo, soma das laterais ao meio, vezes 10.000.

- RESULTADOS

Em ambos os procedimentos foi possível concluir com êxito o intuito dos exames laboratoriais.

- REFERÊNCIAS

http://www.icb.usp.br/mol/10-1-sangue1.html