Técnicas de semeadura, isolamento e contagem dos micro-organismos.

...

∙ Verter 15-20 ml de ágar fundido (44 a 46 °C) na placa de Petri;

∙ Homogeneizar as placas com movimentos suaves rotatórios (em forma de oito), para melhor mistura da amostra com o meio de cultura;

∙ Esperar solidificar;

∙ Inverter as placas e incubar a 35±1 °C por 48±2 horas.

4.4 Semeaduras em meio sólido inclinado (esgotamento).

∙ Retirar inóculo de meio estoque com auxílio da alça de platina;

∙ Depositar o inóculo sobre a superfície do ágar Citrato de Simmons inclinado, fazendo estrias no ágar com alça de platina;

∙ Inverter as placas e incubar a 35±1 °C por 96±2 horas.

4.5 Semeaduras no meio líquido.

∙ Retirar o inóculo do meio estoque;

∙ Transferir para o meio líquido o inóculo, com auxílio da alça de platina;

∙ Incubar o material a 35±1 °C por 48±2 horas.

4.6 Procedimentos referentes à contagem.

4.7 Semeaduras em Profundidade.

4.8 Contagem e cálculo dos resultados.

∙ Selecionar as placas correspondentes à diluição com número de colônias entre 25 e 250 colônias, preferencialmente;

∙ Contar as colônias das placas com diluições correspondentes;

∙ Efetuar a contagem da placa e multiplicar o número de colônias pelo inverso da diluição inoculada;

∙ Expressar o resultado em UFC/ml.

4.9 Semeaduras por esgotamento.

∙ Retirar uma colônia isolada após contagem das placas;

∙ Depositar o inóculo sobre um ponto na superfície da placa com meio de cultura;

∙ Esgotar o inóculo através de estrias em quadrantes, a fim de obter progressivamente menores quantidades do material;

∙ Inverter as placas e incubar a 35±1 °C por 48±2 horas.

5.0 Resultados.

Nos experimento foram realizados os seguintes testes.

- Teste de Lactose;

- Teste de Catalase;

- Teste de Citrato.

- Com os resultados referentes ao Teste de Lactose que o grupo realizou, na placa de Petri de 10-1 foi impossível a contagem. Para realizar uma contagem de placa, tem de haver entre 25 a 250 colônias.

- Placa de 10-2 também foi descartada.

- Placa de 10-3 já foi possível à contagem, totalizando 179 colônias.

- Placa de 10-4 tinha menos de 25 colônias.

- Placa de 10-5 tinha menos de 25 colônias também.

[pic 2][pic 3]

Foto: Itan Rocha

- Assim, podemos calcular o número de colônias pelo inverso da diluição inoculada, sendo 179x103= 1,79x105 UFC/ml.

- Portanto, o leite está acima do nível permitido pela legislação que é de até 10.000 UFC/ml.

- Depois no próximo passo, foi isolado as colônias para a contagem em estrias e quadrantes.

- No último processo de semeadura por esgotamento, após a incubação em temperatura de 35ºC, percebeu-se que não houve o desenvolvimento de organismos mesófilos, que são indicadores de má condição de uso ou consumo do alimento.

6. Conclusão

Portanto, após a visualização dos resultados em laboratório, pode-se perceber que os métodos são eficazes para a contagem de colônias bacterianas. Por meio de diluições a análise da amostra de leite deu acima do exigido pela legislação na terceira placa, então uma vez que as amostras são diluídas, menores são as chances de formação de colônias, tendo somente presenciado em somente uma placa. Após a contagem das placas e tendo inoculado em placa o meio de cultura e posteriormente incubado, não foi identificado a presença de organismos mesófilos indicadores de má qualidade.

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Referências

SILVA, N.; JUNQUEIRA, V. C. A.; SILVEIRA, N. F. A.; TANIWAKI, M. H.; SANTOS, R. F. S.; GOMES, R. A. R. Manual de Métodos de Análise Microbiológica de Alimentos. 3 ed. São Paulo: Livraria Varela, 2007. 552p.

TORTORA, G. J.; FUNKE, B. R.; CASE, C. L. Microbiologia, 6 ed. - Porto Alegre: Artmed, 2000.

BRASIL, Resolução RDC nº 12, de 02/01/2001. Estabelece regulamento técnico sobre os padrões microbiológicos para alimentos. Disponível: Acesso em 31.julho. 2017.

Anexo.

Questionário:

- Qual o objetivo da diluição seriada?

Uma diluição seriada é basicamente uma série de diluições simples que amplifica o fator de diluição. A fonte da amostra para diluição de cada etapa vem da diluição anterior. Todas as diluições na série têm o mesmo fator de diluição, em que a amostra da diluição anterior é usada para fazer a diluição subsequente.

- O que são bactérias mesófilas aeróbias?

Microrganismos aeróbios mesófilos são todos aqueles capazes de crescer em temperatura de 35-37° C em condições de aerobiose. Esses microrganismos indicam a qualidade sanitária com que o alimento foi obtido ou processado.