Microscopia: O microscópio é um instrumento que permite a observação de estruturas não perceptíveis a olho nu

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A finalidade do condensador é projetar um cone de luz sobre as células que estão sendo examinadas no microscópio. Após atravessar as células, esse feixe luminoso, em formato de cone, penetra na objetiva, a qual projeta uma imagem aumentada, no focal da ocular, que, novamente, amplia. Por fim, a imagem fornecida pela retina como uma imagem situada a 25 cm da lente ocular. (Junqueira e Carneiro, 2012, p.22)

A luz que atravessa as lentes condensadoras é uniformemente espalhada sob a lâmina e atravessa o objeto, incidindo na lente objetiva. Estando o objeto colocado anteriormente ao foco da lente objetiva, formar-se-á, no plano focal da lente ocular, uma imagem real (que pode ser projetada em um anteparo), maior e invertida.

A luz, ao atravessar a ocular, formará uma imagem virtual, maior e direita com relação à imagem formada pela objetiva. Entretanto, a imagem final do objeto, proporcionada pelo microscópio, será virtual, ampliada e invertida em relação ao mesmo. E o aumento final da imagem é resultado do produto do aumento proporcionado pelas lentes.

O processo de formação da imagem no microscópio pode ser comparado ao sistema empregado na projeção de um “slide” (Figura 1), no qual, temos a formação de uma imagem real e invertida do objeto original.

Figura 1 - Esquema do trajeto da luz no processo de formação da imagem em um sistema óptico hipotético.

[pic 1]

Fonte: (Carvalho, H.F. & Recco-Pimentel, S.H., 2007)

Elementos do trajeto da luz:

1. Fonte de luz.

2. Um sistema de lentes com função de concentrar a luz sobre o objeto (lâmina ou slide), que no caso do microscópio, se chama condensador.

3. O objeto que é atravessado pela luz (material biológico colocado sobre a lâmina, caso do microscópio: ou filme fotográfico, no caso do projetor).

4. Lente objetiva, formando uma imagem real, aumentada e invertida.

5. Uma lente intermediária, situada no plano de formação da imagem, com a função de condensar a luz proveniente desta, sobre a lente ocular, a qual confere o aumento. No caso do projetor de slide, consta de um anteparo para a projeção da imagem.

6. Lente ocular, que forma a imagem final do objeto ao microscópio. Esta imagem é virtual, aumentada e invertida.

7. Olho do observador.

Descrição do ajuste para Iluminação Köhler

Descoberta inicialmente por August Köhler em 1893, a iluminação Köhler consegue excluir a iluminação irregular no campo de visão para que todas as peças da fonte de luz contribuam para a iluminação do que for ser observado. Atualmente, existem dois tipos: um método no qual a luz é transmitida através do tecido (transmitida) e um método onde ela é refletida do tecido (incidente). A iluminação de Köhler transmitida é usada para tecidos transparentes ou semitransparentes, enquanto a iluminação Köhler incidente é útil para objetos tais como o metal que não transmite luz.

Para regular o microscópio óptico de acordo com a iluminação de Köhler, se faz necessário seguir as seguintes etapas numeradas de 1 á 13, com a figura 1 para ilustração das peças do microscópio para melhor entendimento.

- Abra completamente a Íris da Fonte de Luz e o Diafragma do Condensador.

- Ligue a Fonte de Luz e ajuste a Intensidade da Iluminação para cerca de 70%.

- Abaixe completamente a platina utilizando os parafusos macrométrico e micrométrico.

- Coloque a objetiva de 4x no caminho da luz.

- Insira a lâmina já preparada e com lamínula.

- Ajuste o foco para que fique na margem da lamínula.

- Abaixe completamente o Condensador (utilize o Parafuso Regulador de altura do Condensador).

- Feche completamente a Íris da Fonte de Luz.

- Eleve o Condensador lentamente até que a margem da Íris esteja completamente resolvida na imagem – você deve conseguir ver toda a luz passando por um pequeno polígono.

- Centralize este polígono usando os parafusos de centralização do Condensador.

- Abra a Íris somente até a margem poligonal sair do campo de visão.

- Finalmente, feche o Diafragma do Condensador para aumentar o contraste na amostra. O exato grau de fechamento do diafragma deve ser determinado experimentalmente.

- Ajustes finais na intensidade da luz e diafragma devem ser feitos visualizando o espécime. Quando trocar para uma objetiva de maior aumento, repita os passos de 6 à 12.

[pic 2]

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Observações:

Durante a aula prática, foram observadas três lâminas, cada uma corada com um tipo de corante. Estes foram:

Lâmina 9: Esôfago.

Corante: Hematoxilina-eosina.

Nesta lâmina, pôde ser observada uma camada circundada pelo epitélio da mucosa esofágica, formada por epitélio pavimentoso estratificado não queratinizado, tecido conjuntivo frouxo com fibras colágenas, e núcleos de fibroblastos. Seguindo para a submucosa, pode-se observar que a mesma contém glândulas esofagianas, responsáveis por secretar muco para lubrificação e proteção da mucosa. Em seguida, na camada muscular da porção proximal do esôfago, foram encontradas células musculares esqueléticas – na porção média, células musculares esqueléticas e lisas, e na porção mais distal, células musculares lisas. As fibras musculares possuem arranjo longitudinal externo e circular interno.

A camada mais externa é serosa na região que está na cavidade peritoneal, e é adventícia nas demais regiões.

Lâmina 36: Cerebelo.

Corante: Nitrato de prata.

Nesta lâmina, observou-se uma zona cortical, composta de substância cinzenta que envolve um centro de substância