Relatorio de bioquímica e suas estruturas
Por: Lidieisa • 5/9/2017 • 2.033 Palavras (9 Páginas) • 623 Visualizações
...
(nm)
Transmitância T( )[pic 3]
Absorbância
D.O ou Abs
450
66.1
0.179
500
34.1
0.467
540
21.7
0.664
600
33.3
0.478
650
70.4
0.152
1.2 Após temos os resultados realizamos a curva de calibração (demonstração da lei de Lambert – beer e limite de linearidade).o gráfico vem anexo (gráfico 1).
1.3 Para a Determinação da concentração de proteínas totais da nossa solução problema de numero 4 .Partimos da solução stock de 200mg/dl de proteínas e empregando água destilada para diluição, foram preparados em três microtubulos 100 microlitros de soluções padrão ,com concentrações que varia de 16 e 160 mg/ml.
[pic 4][pic 5][pic 6]
P2 (32) P5 (80) P8 (128)
Para ter conhecimento da quantidade de água destilada a ser utilizada na preparação das soluções padrões foram realizados cálculos, em seguida completamos a (tabela 1).
Cálculos:
[pic 7][pic 8][pic 9]
TUBO
ÁGUA (µl)
SOLUÇÃO STOCK(µl)
CONCENTRAÇÃO (mg/ml)
Absorbância
Transmitância
1
16
2
20
80
32
0.241
57.4
3
48
4
64
5
50
50
80
0.430
37.5
6
96
7
112
8
80
20
128
0.664
21.7
9
144
10
160
Para determinarmos a concentração de proteínas da nossa solução problema transferimos 0.02 ml da solução problema a um tubo de ensaio e adicionamos 1 ml do reagente de biureto ,em seguida transferimos para a microcubeta de vidro e submetemos ao aparelho de espectrofotômetro no comprimento de onda onde a proteína possui-o maior absorção , que foi ao comprimento de onda de 540 nm , ao obter a absorbância da nossa amostra utilizamos o método do fator para se obter a concentração da nossa solução problema . F= AP/ ABS= X
METÓDO DE ABSORÇÃO NO ULTRAVIOLETA.
PROBLEMA: Determinar a concentração de proteínas da nossa solução problema por absorção no ultravioleta. Este método se baseia no fato de que as proteínas no ultravioleta.
INTRODUÇÃO
O método de absorção no ultravioleta utilizado para determinar a concentração de proteínas baseia-se no fato de proteínas mostram absorção na região do comprimento de onda de 280nm especialmente em PH neutro, aminoácidos como, por exemplo, tirosina e triptofano possuem uma absorção significativa.
- PARTE EXPERIMENTAL
1.1. Materiais e Métodos
- Solução padrão concentração de albumina = 1mg/ml
- Solução de proteína de concentração desconhecida
- Água destilada que foi utilizado como branco
- Espectrofotómetro
- Microcubetas para medição no visível ( quartzo)
- Tubos de ensaio
- Pipetas
- Ponteiras
- Reagente biureto
- Procedimento
1..1 Espectro de absorção
Conhecer o cumprimento de onda onde a proteína apresenta sua máxima absorção, realizada a transferência da solução padrão (albumina = 1 mg/ml para microcubeta do espectrofotômetro, em uma outra microcubeta utilizou-se agua destilada como branco ,que foi empregado para regular o autozero do aparelho ,.
Com auxilio do espectrofotômetro, as amostra contida nas microcubetas de vidro foram submetidas uma a uma aos comprimentos de onda de 260, 270, 280, 290, e 300 nm, para verificação da sua respectiva absorbância , tendo a cautela de sempre zerar o parelho com o branco ( agua destilada) a cada comprimento de onda a qual amostra foi submetida .
(nm)
Transmitância T()[pic 10]
Absorbância D.O ou Abs
260
10.4
0.981
270
...