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Relatorio de bioquímica e suas estruturas

Por:   •  5/9/2017  •  2.033 Palavras (9 Páginas)  •  184 Visualizações

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...

(nm)

Transmitância T( )[pic 3]

Absorbância

D.O ou Abs

450

66.1

0.179

500

34.1

0.467

540

21.7

0.664

600

33.3

0.478

650

70.4

0.152

1.2 Após temos os resultados realizamos a curva de calibração (demonstração da lei de Lambert – beer e limite de linearidade).o gráfico vem anexo (gráfico 1).

1.3 Para a Determinação da concentração de proteínas totais da nossa solução problema de numero 4 .Partimos da solução stock de 200mg/dl de proteínas e empregando água destilada para diluição, foram preparados em três microtubulos 100 microlitros de soluções padrão ,com concentrações que varia de 16 e 160 mg/ml.

[pic 4][pic 5][pic 6]

P2 (32) P5 (80) P8 (128)

Para ter conhecimento da quantidade de água destilada a ser utilizada na preparação das soluções padrões foram realizados cálculos, em seguida completamos a (tabela 1).

Cálculos:

[pic 7][pic 8][pic 9]

TUBO

ÁGUA (µl)

SOLUÇÃO STOCK(µl)

CONCENTRAÇÃO (mg/ml)

Absorbância

Transmitância

1

16

2

20

80

32

0.241

57.4

3

48

4

64

5

50

50

80

0.430

37.5

6

96

7

112

8

80

20

128

0.664

21.7

9

144

10

160

Para determinarmos a concentração de proteínas da nossa solução problema transferimos 0.02 ml da solução problema a um tubo de ensaio e adicionamos 1 ml do reagente de biureto ,em seguida transferimos para a microcubeta de vidro e submetemos ao aparelho de espectrofotômetro no comprimento de onda onde a proteína possui-o maior absorção , que foi ao comprimento de onda de 540 nm , ao obter a absorbância da nossa amostra utilizamos o método do fator para se obter a concentração da nossa solução problema . F= AP/ ABS= X

METÓDO DE ABSORÇÃO NO ULTRAVIOLETA.

PROBLEMA: Determinar a concentração de proteínas da nossa solução problema por absorção no ultravioleta. Este método se baseia no fato de que as proteínas no ultravioleta.

INTRODUÇÃO

O método de absorção no ultravioleta utilizado para determinar a concentração de proteínas baseia-se no fato de proteínas mostram absorção na região do comprimento de onda de 280nm especialmente em PH neutro, aminoácidos como, por exemplo, tirosina e triptofano possuem uma absorção significativa.

- PARTE EXPERIMENTAL

1.1. Materiais e Métodos

- Solução padrão concentração de albumina = 1mg/ml

- Solução de proteína de concentração desconhecida

- Água destilada que foi utilizado como branco

- Espectrofotómetro

- Microcubetas para medição no visível ( quartzo)

- Tubos de ensaio

- Pipetas

- Ponteiras

- Reagente biureto

- Procedimento

1..1 Espectro de absorção

Conhecer o cumprimento de onda onde a proteína apresenta sua máxima absorção, realizada a transferência da solução padrão (albumina = 1 mg/ml para microcubeta do espectrofotômetro, em uma outra microcubeta utilizou-se agua destilada como branco ,que foi empregado para regular o autozero do aparelho ,.

Com auxilio do espectrofotômetro, as amostra contida nas microcubetas de vidro foram submetidas uma a uma aos comprimentos de onda de 260, 270, 280, 290, e 300 nm, para verificação da sua respectiva absorbância , tendo a cautela de sempre zerar o parelho com o branco ( agua destilada) a cada comprimento de onda a qual amostra foi submetida .

(nm)

Transmitância T()[pic 10]

Absorbância D.O ou Abs

260

10.4

0.981

270

...

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