Pratica de Ensino

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1. Fixou-se a coluna verticalmente no suporte universal com o auxilio de garras metálicas.

2. Preparou-se uma suspensão com hexano: acetona 2:1 (30:15) 45ml de solução e 16 gramas de sílica gel.

3. Com o auxilio do funil, colocou-se a suspensão dentro da coluna.

4. Deixou-se o material assentar.

5.3 Aplicação da amostra

1. Após o empacotamento da coluna, abriu-se a torneira até que a camada de solvente se aproximasse da sílica.

2. Aplicou-se a solução de extrato de couve com uma pipeta de Pasteur, espalhando de maneira uniforme sobre a fase estacionária.

3. abriu-se a torneira até o extrato atingir o nível do recheio.

4. Iniciou-se a eluição com Hexano:acetona 2:1. (30:15) 45ml

5. Após a adição do eluente, com escoamento adequado, coletou-se as frações, completando volume de eluente e sem deixar a coluna secar.

6. Resultado e Discussão.

Durante a execução do procedimento experimental macerou-se folha de couve com a mistura do solvente preparado de hexano1: acetona2 2:1 (30:15) sendo 45 ml de solução, aumentando a superfície de contato possibilitando assim a maior solubilidade de pigmentos na solução retirada da fase aquosa do extrato.

Foi utilizado um solvente apolar em maior proporção, e um solvente polar em menor proporção., foi necessário utilizar solventes com polaridades diferentes porque os pigmentos a serem separados possuíam polaridades diferentes. Sendo ele : clorofilas polares3 e o β caroteno4. (ver estruturas citadas em anexo)

Após o preparo foi observado as duas fases, uma verde e outra amarela. A parte esbranquiçada indicou a presença de água, a presença desta fase se deu devido a água não se solubilizar no extrato. Logo em seguida esta fase foi totalmente retirada para que não houvesse interferência no processo cromatográfico.

Durante a observação da eluição da amostra, notou-se que a primeira banda a eluir possuía a coloração amarelada. Indicando que primeiramente foram separados os carotenos, que puderam ser confirmados teoricamente. Os carotenos, que puderam ser confirmados teoricamente. Os carotenos são apolares, ao passarem pela fase estacionária não ficarão retidos porque a fase estacionária é polar e o eluente arrasta o composto semelhante a sua polaridade.

Foram obtidos vários cuidados durante a execução do procedimento para que não houvesse bolhas e nem secasse a coluna cromatográfica, porque a separação seria impossibilitada.

O mecanismo utilizado foi um processo físico, dado pela interação da fase estacionária da fase móvel com a amostra, foi utilizado neste experimento o processo de adsorção baseado nas interações intermoleculares.

7. Conclusão.

Durante a execução do procedimento de extração e separação por cromatografia dos pimentos foliares, observou-se que é possível comprovar experimentalmente alguns conceitos estudados, como: separação de substâncias polares de apolares, ou seja durante o processo foi observado que a fase estacionária a sílica gel retém a clorofila que tem característica polar, a fase móvel que é representada pelo solvente de Acetona:Hexano arrasta o β caroteno que é apolar.

Uma propriedade importante dos compostos analisados foi a polaridade, observou-se que a polaridade da fase estacionária, do eluente e da amostra governa todo o processo analítico. Por isso e importante conhecer experimentalmente e teoricamente todas as propriedades de um composto.

A cromatografia em coluna é um procedimento de custo baixo, de fácil execução permitindo assim que vários compostos possam ser analisados.

8. Referências.

1.COLLINS, C,H, BRAGA, G.L BONATO, PS. Fundamentos da cromatografia, editora Unicamp, 2006.

2.CONSTANTINO, MG, SILVA, G.V.J, DONATE, PM. Fundamentos de Química Experimental, editora da universidade de São Paulo, 2011.

9. Anexos

Figura 1: Hexano: [pic 1] Formula Química C6H14, grupo funcional Hidrocarboneto com ligações simples conferindo caráter apolar.

Figura 2 :Acetona: [pic 2] Formula Química C3H6O, grupo funcional: Cetona. Devido a presença do heteroátomo de Oxigênio esta molécula possui caráter polar.

Figura 3: Clorofilas A e B [pic 3]Fórmula Química da Clorofila A C55H72O5N4Mg. Formula Química da Clorofila B C55H70O6N4Mg: clorofila é a designação de um grupo de pigmentos fotossintéticos presente nos cloroplastos das plantas.

Figura4 :β caroteno: [pic 4] Fórmula Química C40H56: O betacaroteno é um pigmento carotenoide antioxidante.