O Cromatografia em camada delgada

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2) Procedimentos experimentais

Triturou-se algumas folhas de espinafre juntamente com 15mL de éter etílico (C2H5)2O) e 5 mL de acetona (CH3COCH3) em um amolfariz. Filtrou-se o extrato vegetal. Com o auxílio de um capilar, aplicou-se a amostra de vegetal na parte inferior da placa, a 0,5 cm da base da placa de sílica-gel. Colocou-se a placa em um béquer tampado, contendo o eluente, de maneira que o nível de eluente estivesse abaixo do nível das manchas na placa. Após a eluição retirou-se a placa do béquer e esperou-se até que estivesse seca. Após a secagem transferiu-se a placa para um béquer fechado contendo iodo sólido e aguardou-se. Tal prática foi feita em triplicata com três diferentes eluentes, sendo eles (1)-10 mL de etanol, (2)- 10 mL de hexano (CH3(CH2)4CH3) e (3)- 9 mL de hexano mais 1 mL de etanol (C2H6O).

- Resultados e Discussões

Neste experimento foram utilizadas folhas de espinafre para a extração de pigmentos.

Após a obtenção da solução de pigmentos esta foi aplicada em uma placa de sílica (fase estacionária) sendo inserido em uma cuba em contato com os vapores do solvente (fase móvel).

A fase móvel ascendeu pela fase estacionária por ação capilar, isso fez com que a amostra fosse arrastada e seus diversos componentes foram separados. A cuba foi coberta com um vidro de relógio para evitar que o solvente entrasse em equilíbrio com a atmosfera, o que poderia prejudicar os resultados.

Antes de discutir os resultados é válido lembrar que na cromotagrafia o solvente utilizado vai arrastar componentes da substância com a mesma polaridade dele. Ressalta-se também que o espinafre é composto de quatro componentes sendo eles: clorofila A e clorofila B, ambas responsáveis pela coloração verde, β-caroteno responsável pela cor vermelha, alaranjada e amarelada das frutas, e a xantofila responsável pela coloração amarela. A única diferença entre as clorofilas presentes no espinafre é que a clorofila A possui um grupo metil e a clorofila B possui um aldeído, e é justamente esse aldeído que faz com que a clorofila B seja mais polar que a clorofila A. O β-caroteno é apolar e xantofila é polar. Ao utilizar o eluente etanol (polar) percebeu-se uma mancha amarela arrastada pela sílica gel, podendo concluir que estão presentes ali a clorofila B e a xantofila pois, ambos são polares. Ao utilizar o Hexano (apolar) não observou-se nenhum arraste dos componentes polares pois, o eluente é totalmente apolar.

Por meio da análise da cromatograma percebeu-se que as substâncias separadas foram clorofila a, clorofila b e carotenos, as duas primeiras são substâncias polares e avançaram menos que os carotenos (apolar), isso ocorreu devido ao solvente utilizado possuir uma polaridade média, a parte apolar do solvente (hexano) separou por adsorção os carotenos e a parte polar (etanol) separou as clorofilas. Por causa da maior quantidade de hexano na mistura os carotenos foram deslocados por um espaço maior pela capilaridade.

Outro ponto analisado foi os fatores de retenção (Rf) dos compostos separados. Quanto maior o Rf maior será a mobilidade da substância. A clorofila b é a que possui o menor Rf por apresentar em sua estrutura uma grande quantidade de grupos polares. Os valores dos fatores de retenção encontram-se disponíveis abaixo:

[pic 2]

Eluentes Fator de retenção

[pic 3]

Etanol 0,66

Hexano 0,83

Hexano + Etanol 1,00

Quanto ao fator de retenção (Rf) para cada eluente obteve-se um fator diferente o que já era esperado devido a diferença de polaridade de cada eleunte, observou-se que ao utilizar o eluente (etanol + hexano) foi quando pode-se ver melhor as substancias presente no extrato de espinafre pois havia duas substâncias uma polar e uma apolar.

Com base no conhecimento sobre a estrutura dos três principais pigmentos e na descrição dada, podemos deduzir que o pigmento superior é o β-caroteno, visto que é um hidrocarboneto pouco polar. Os outros dois pigmentos são clorofilas. A análise da estrutura das clorofilas indica que ficou mais elevada é a clorofila-a, pelo fato de ser menos polar que a clorofila-b. Assim, podemos concluir que, quanto a polaridade, podemos fazer a seguinte classificação:

β-caroteno > clorofila a (ou alfa) > clorofila b (ou beta)

4) Conclusão

A cromatografia em camada de sílica em gel, não requer o uso de equipamentos modernos, seu procedimento é simples, rápido e de fácil manipulação. Através dessa técnica foi possível separar a clorofila a, clorofila b e carotenos da folha de espinafre cada um representado por uma cor característica, verde-claro para clorofila A, verde-escuro para clorofila B e amarelo para os β- carotenos. Conclui-se que com essa prática atingiu-se o objetivo de conhecer e entender a cromatografia em camada delgada e identificação de substâncias por meio dessa técnica.

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