Análise Qualitativa de Algumas Enzimas

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Peroxidase:

A peroxidase é uma importante enzima das plantas e está envolvida em diversas reações, ligações de polissacarídeos, oxidação do ácido indol-3-acético, ligações de monômeros, lignificação, cicatrização de ferimentos, oxidação de fenóis, defesa de patógenos, regulação da elongação de células e outras.[4]

Elas pertencem à classe das oxidoredutases, cuja função é catalisar a oxidação de componentes celulares, tais como peróxido de hidrogênio ([pic 23][pic 24]) ou peróxidos orgânicos. Elas são largamente distribuídas nos reinos animal e vegetal, assim como em microrganismos.[5]

Tanto a catalase quanto a peroxidase catalisam reações com o peróxido de hidrogênio, porém, a diferença entre elas está no mecanismo de ação. Enquanto a catalase reduz diretamente a água oxigenada a água e gás oxigênio, a peroxidase o faz acelerando a reação da água oxigenada com um substrato específico como, por exemplo, o guaiacol, formando um composto marrom escuro. [6]

O esquema na figura (2) representa essa reação:

[pic 25][pic 26]

As peroxidases apresentam inúmeras aplicações em análises de alimentos, análises clínicas e biológicas, e – em conjunto com outras enzimas – na conservação de certos alimentos. Além disso, elas podem catalisar a oxidação de grande variedade de fenóis e aminas aromáticas, que ocorrem naturalmente em tecidos de plantas. Esta capacidade é largamente usada na indústria de alimentos como agente esterilizante e pode conduzir à determinação dos valores de perda nutricional e detecção do surgimento de compostos tóxicos como hidroperóxidos, epóxidos e aldeídos. A peroxidase pode ainda indicar a presença de hidrogênios e peróxidos orgânicos liberados no meio ambiente, originados de procedimentos industriais, que podem contaminar água potável e a natureza. Métodos convencionaispara a determinaçãode peróxido de hidrogênio estão sendo atualmente adaptados para avaliação com a enzima peroxidase como sensor (biossensor). [7]

Urease:

A urease é uma enzima que, em meio aquoso, catalisa a hidrólise da uréiaem amônia e dióxido de carbono e ocorre em algumas sementes, tais como soja, melão, melancia, entre outras. Algumas enzimas requerem um componente nãoprotéico para sua atividade denominado cofator. O cofator enzimático da urease é o íonmetálicoNi2+, portanto, a presença de íons de níquel ativa o sítio da urease e é essencial tanto para a atividade funcional como para a integridade estrutural dessa enzima. A reação catalisada pela uréase pode ser observada a seguir na figura (2).[8]

[pic 27]

A urease é uma substância extensamente estudada, devido à sua aplicabilidade na agricultura e na medicina. Atualmente, a urease é utilizada em procedimentos de diagnósticos clínicos, na determinação de uréia em fluídos biológicos como urina e sangue. Além disso, a uréia é utilizada como suplemento na alimentação de animais, na agricultura (como fertilizante), na fabricação de plásticos, na indústria farmacêutica, entre outros. [8][pic 28]

- RESULTADOS E DISCUSSÕES

A determinação da presença de enzimas das amostras será determinada apenas pela visualização de reações nas amostras como a alteração de coloração, presença de gases e pela utilização de indicadores.

Foram estudadas amostras de batata, leite pasteurizado e UHT e farelo de soja cru e tostado.

[pic 29]

Figura 4- Organização da Prática

FONTE: Próprios autores

3.1 Identificação da presença da enzima Catalase em amostra de batata.

Como amostra, foi utilizada uma suspensão enzimática de batata com seu pH tamponado a 7,0.

Em 5mL de amostra foram adicionados 10mL de NaOH com concentração de 0,1M. Logo após a adição do NaOH observou-se o desprendimento de gases, o que indica a presença da enzima Catalase na amostra.

[pic 30]

Figura 5– Desprendimento de gás em amostra de batata

FONTE: Próprios autores

3.2 Identificação da presença da enzima Peroxidase em amostra de leite pasteurizado e UHT.

Foram adicionados a dois tubos de ensaio 10mL de cada um dos leites e então foram postos em aquecimento a 45°C por 5min em banho-maria. Após retirada do banho, foram adicionados 2mL de solução de guaiacol e 2 a 3 gotas de NaOH e agitou-se. A alteração de coloração deveria aparecer na amostra de leite pasteurizado, pois, o leite pasteurizado não é aquecido a temperaturas acima de 75°C, temperatura na qual a Peroxidase sofre degradação, porém, a coloração salmão não foi observada. Atribui-se o erro a provável confusão no momento de adicionar as amostras nos tubos de ensaio. No leite UHT a coloração permaneceu branca, o que indica que não há presença de Peroxidase.

[pic 31]

Figura 6 –Comparação dos tipos de leite

FONTE: Próprios autores

3.3 Identificação da presença da enzima Urease em amostra de farelo de soja cru e farelo de soja tostado.

A 0,1g de farelo de soja cru e tostado, foram adicionados 4mL de solução de ureia e então postos em repouso a 30°C por 30min.

[pic 32]

Figura 7 – Amostras de farelo de soja tostado e cru em solução de ureia

FONTE: Próprios autores

Após retirada do banho, foi adicionado as amostras gotas do indicador vermelho de fenol. E também foi feito um branco de solução de ureia e indicador. A presença da enzima urease foi observada na amostra de farelo de soja cru, pela leve alteração de cor e desprendimento de gás, como mostra a figura.

[pic 33]

Figura 8– Comparação entre amostras e branco

FONTE: Próprios autores