Relatório Microbiologia

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3. Escolha uma colônia e pegue bactérias com a alça bacteriológica, de leve, de pequenas batidinhas com a alça na gota de água destilada, sem tirar a alça da lâmina, faça círculos de dentro para fora para espalhar as bactérias da colônia escolhida, obtendo um esfregaço de forma oval, uniforme e fino.

4. Balance a lâmina perto do bico de Bunsen para secar.

5. Passe a lâmina três vezes (três idas e três voltas) pelo fogo para fixar o material na lâmina.

3.3 Colorações de Gram

3.31 Materiais Necessários:

Tubos com água destilada esterilizada

Lâminas de microscopia

Alça bacteriológica

Bateria de coloração de GRAM (cristal violeta, lugol, álcool-acetona e fucsina)

Microscópio óptico comum

Óleo de imersão

3.32 Métodos:

1. Coloque a lâmina com o esfregaço sobre um suporte.

2. Cubra a lâmina com cristal violeta (Gram I) e deixe agir por 1 minuto.

3. Lave a lâmina em jato fraco de água corrente, do lado contrário ao esfregaço.

4. Cubra a lâmina com lugol (Gram II), deixe agir por 1 minuto e depois lave novamente a lâmina.

5. Cubra a lâmina com a solução de álcool-acetona (Gram III), verifique a descoloração que deve ocorrer em cerca de 10 segundos.

6. Cubra a lâmina com fucsina (Gram IV), deixe agir de 30 a 60 segundos, e, novamente lave a lâmina.

7. Seque a lâmina, com papel toalha com cuidado, sem esfregar, apenas pressionando levemente o papel contra a lâmina.

8. Leve a lâmina ao microscópio e observe em objetiva de imersão. (Não se esqueça de colocar uma gota de óleo para imersão sobre o esfregaço).

9. Observe a lâmina em um microscópio óptico comum na objetiva de 100x.

4. Resultados e Discussão

As bactérias observadas e cultivadas da primeira coloração de gram são em forma de cocos por terem forma redonda e gram positivas por depois de todo o processo de coloração de gram, apresentarem cor roxa, o que significa que elas têm parede espessa formada por peptidoglicano.

As bactérias observadas e cultivadas da segunda coloração de gram são em forma de bastonetes por terem forma parecida com um retângulo arredondado e gram negativas por depois de todo o processo de coloração de gram, apresentarem cor vermelha, o que significa que elas têm parede fina e uma membrana externa lipoproteica.

O resultado atingiu o objetivo inicial sendo possível descrever as características das bactérias e o resultado da técnica da coloração de gram.

5. Conclusão

Com a coloração experiência foi possível descrever quais bactérias estão em nossa microbiota normal, no caso orofaringe e nasofaringe. Na primeira etapa do experimento, foi feito a lâmina apenas com a orofaringe, pois a nasofaringe que cresceu mais, na teve colônias isoladas, já na orofaringe, cresceram três colônias isoladas vistas a olho nu, sendo escolhida uma delas para o processo da coloração de gram e esfregaço.

A cultura de orofaringe, após a incubação não teve crescimento de bactérias, o que já se era esperado, pois a bactéria Escherichia coli esta presente na microbiota normal, porem, é intestinal. Por este motivo a segunda lâmina foi feita de uma cultura com resultados positivos, apresentando crescimento bacteriano na cor azul-preto com brilho metálico, uma característica da bactéria Escherichia coli. Após a lâmina pronta, foi observada sua forma de bastonetes gram negativos.

Chega-se ao objetivo, foram isoladas de bactérias das vias aéreas superiores e nos tecidos abaixo das unhas (sub-ungueais) e observadas e identificadas a bactéria do trato intestinal Escherichia coli.

6. Referências Bibliográficas

RAMOS, Ana Paula Dores. Microbiologia: Apostila de aulas práticas. São José / Santa Catarina: Estácio Ensino Superior, 2016. 31 p.

SISTIA, Camilo Del. Microbiologia básica: 1ª ed. - Rio de Janeiro: SESES - Estácio, 2015. 156 p.