Efeito Cicatrizante da Arnica

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O extrato de Solidago chilenses será preparado através de maceração hidroalcoólica 70% (técnica que extrai o principio ativo do vegetal utilizando um solvente, essa preparação do vegetal e o solvente ficam em repouso por alguns dias sendo agitada algumas vezes.) e rotaevaporação (técnica que concentra o extrato obtido da maceração retirando o solvente.).

Preparação do creme com extrato de Solidago chilenses

O extrato de Solidago chilenses será incorporado em um creme base não iônico, preparado com Polawax 14% (cera auto-emulsionante não iônico, BHT 0.05% (antioxidante), Phenonip 0.5% (conservante), óleo mineral 3% (emoliente), EDTA 0.05% (quelante), Propilenoglicol 4% (umectante), Água destilada q.s.p 100% (veiculo).

Inicialmente, serão preparados cremes com 3 diferentes pH’s: 4,0 7,0 e 9,0. O creme usado no tratamento dos animais será aquele que apresentar melhor resultado de permeabilidade cutânea in vitro.

Teste de permeabilidade in vitro e ex vivo do creme com Solidago chilenses

Os estudos de permeabilidade in vitro e ex vivo serão realizados em células de Franz, com agitação e temperatura (37 ºC) constantes. O estudo in vitro será realizado com membranas sintéticas hidratadas com tampão fosfato, pH 7,4, 24 horas antes do ensaio. O estudo ex vivo será realizado com a pele do dorso de animais diabéticos e não diabéticos.

A pele removida e as membranas sintéticas serão colocadas na célula de Franz em contato com o líquido (tampão fosfato, pH 7,4) no compartimento receptor.

Periodicamente, serão coletadas amostras para avaliar a permeabilidade do extrato de Solidago chilenses incorporado no creme. A análise de permeabilidade será realizada através da identificação e da intensidade de bandas espectrofotométricas, características do extrato de Solidago chilenses (SATO et al., 2007).

Delineamento experimental

O estudo será realizado com 36 ratos, machos, da raça Wistar, com peso variando entre 160 – 200g. Esses animais serão acondicionados no laboratório de Bioquímica da Uniararas, receberão água e alimentação ad libitum e estarão sujeitos às condições de temperatura, luminosidade e umidade ambientes.

Os animais serão divididos em 2 grupos: animais diabéticos e animais não diabéticos. Cada grupo será subdividido em animais que serão tratados com o creme contendo Solidago chilenses e animais que serão tratados somente com o creme base.

Os animais serão tratados por, no máximo, 21 dias. A cada 7 (sete) dias 3 (três) animais de cada subgrupo serão sacrificados para a realização do teste de permeabilidade ex vivo, teste de função hepática e análises histológicas.

Indução do diabetes mellitus em ratos

A indução do diabetes será feita com solução salina de aloxana (40 mg/Kg de peso corporal), via intraperitoneal, após um período de 24 horas de jejum, em 21 ratos machos, da linhagem Wistar, com peso médio de 200 gramas. Serão considerados diabéticos, para formação dos grupos, os ratos que apresentarem melhor resposta após 5 dias. De acordo com TONIOLO et al.(1980) são considerados diabéticos os animais que após a indução com aloxana apresentarem um nível de glicose sanguínea igual ou maior do que a média do grupo controle acrescentando três vezes o desvio padrão deste grupo.

Incisão cutânea

Os animais serão anestesiados com xilocaina, e após a anestesia será realizada a epilação por tração manual dos pêlos do dorso com extensão de 6cm no comprimento e 6cm na largura.Em seguida será realizada a incisão, com bisturi, 4cm no comprimento e 2cm na largura (AMORIM et al., 2006).

Tratamento dos animais

A aplicação pós-operatória do creme com extrato de Arnica será realizada manualmente, aplicando 10 mL com seringa sem agulha nas feridas dos animais do grupo experimento, diariamente, até o dia anterior a morte de acordo com a data estabelecida para cada grupo. Também serão realizadas medidas da ferida no 7º, 14º e 21º dias de observação com paquímetro. Antes da morte, os animais serão novamente pesados.

Coleta de amostras

Após o tratamento, os animais serão anestesiados com Thionembutal 30 mg/Kg (FUSCO et al., 2002) para que seja realizada a coleta de sangue, por punção cardíaca, de lóbulos hepáticos (sempre o mesmo lóbulo) e de pele (da região cicatrizada) para a análise histológica.

Testes bioquímicos de função hepática

A atividade das enzimas alanina aminotransferase (ALT) e aspartato aminotransferase (AST) presentes no soro são um marcadores clássicos de função hepática. A atividade dessas enzimas será avaliada de acordo com instruções do fabricante do Kit LABTEST Diagnóstica. As amostras de soro serão preparadas e as atividades avaliadas imediatamente após a coleta das amostras de sangue.

Análise estatística

As análises estatísticas serão realizadas com ajuda do software Prism 3.0, aplicando ANOVA, teste de Tuckey.

RESULTADOS ESPERADOS

Neste trabalho espera-se observar o possível potencial hepatotóxico de uma formulação contendo o extrato alcoólico de Solidago chilenses e a sua diferença na permeação em pele de ratos normais e diabéticos.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

ROBBINS, S. L.; COTRAN, R.S. Patologia : bases patológicas das doenças. 7.ed. Rio de Janeiro: Elsevier, 2005. xix, p.112-120.

KIERSZENBAUM,