Bioquimica Infravermelho em Quimica Clinica

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A luz proveniente da lâmpada é colimada em um feixe de luz o qual passa através da solução de teste. Variadas maneiras , incluindo-se lentes ou fibras óticas são usadas para executar esta colimação. Teoricamente, a única modificação suposta 'as características da luz é a quantidade de luz absorvida pela solução presente no seu caminho. No caminho desta luz pode ser incluído um ou mais fendas ou fibras óticas.

A luz visível ou ultravioleta não se comporta como a teoria da passagem da luz. Em graus variados, as difrações devidas 'a soluções lipemicas, causam a perda desta colimação.Os efeitos desta perda de colimação variam, mas coletores de fibra ótica ou fendas, complicam estes efeitos. Pequenas diferenças na geometria dos elementos óticos causam o grau de variação destes efeitos. Desta maneira, mesmo instrumentos do mesmo modelo podem produzir diferentes níveis de interferência na presença de lipemia. Conseqüentemente, não é incomum em dois instrumentos do mesmo modelo produzirem resultados diferentes de soros controles fracamente turvos.

Em contraste, a luz infravermelho se comporta de uma maneira mais próxima da teoria porque a luz é fracamente difratada em soluções lipemicas. Conseqüentemente, não somente são diminuídos os efeitos da lipemia;as variações de instrumento para instrumento são mínimas. Quando químicas infravermelhos são usadas, os laboratórios muitas vezes conseguem paridades de resultados entre instrumentos de diferentes fabricantes.

A detecção infravermelho melhora muito a relação sinal-ruido em espectrofotômetros clínicos. Nesta discussão , sinal é a quantidade de absorbância produzida por uma quantidade do analito, usualmente referida pela sensibilidade fornecida pela diluição amostra - reagente. Ruído é a quantidade de absorbância de fundo das substâncias cromáticas presentes na amostra. Em geral, a sensibilidade do cromógeno por molécula do analito determina a quantidade de sinal. A absorbância de fundo devido 'as substancias cromáticas do soro determina o ruído. A relação sinal-ruido das detecções infravermelhos, e as variações de instrumento para instrumento fornecem vários benéficos efeitos. Estes efeitos serão explorados em termos de:

- · Limites dinâmicos do ensaio

- · Sensibilidade

- · Precisão

- · Interferências Cromáticas

Os limites dinâmicos de uma metodologia de ensaio são muitas vezes limitados pelos limites de medidas do espectrofotômetro usado na automação. Muitos dos instrumentos tem um limite superior de 1,5 unidades de densidade ótica. Portanto, o limite total que pode ser utilizado para medir a cor produzida pelo analito e a absorbância de fundo deve ser acomodado dentro deste limite. Efetivamente, uma concessão deve ser feita para a quantidade de absorbância de fundo que pode ser encontrada quando se escolhe o limite de sensibilidade que pode ser produzido pelo cromógeno. Por exemplo, se um nível patológico muito alto de glicose for encontrado, a sensibilidade do teste é limitada pela quantidade de absorbância produzida pela glicose menos a quantidade de absorbância das substancias cromáticas. Efetivamente, a sensibilidade do cromógeno utilizado é limitada pelos limites dinâmicos da química.

Quando detectado na região infravermelho, um cromógeno mais sensível pode ser utilizado porque tem uma absorbância de fundo muito baixa. Isto vem a ser particularmente significante nas detecções de estados de hipoglicemias aonde a absorbância de fundo pode ser muito alta relativamente ao sinal produzido pelo nível de glicose.

Calibração

Quando se utiliza um método livre de interferentes, deve se utilizar um calibrador com estas características uma vez que os valores assinalados são falsos muitas vezes.

Por exemplo, a maioria dos fabricantes de analisadores automáticos hoje em dia usam multicalibradores nos quais os valores são específicos para os métodos do fabricante. Se métodos de referencia são utilizados para estabelecer os valores de calibração, pacientes com valores normais poderão não concordar com os métodos de referencia quando se calibra com métodos com interferentes. Conseqüentemente, os valores dos calibradores são "ajustados" de maneira que os valores dos pacientes normais estejam corretos.

Soros multicalibradores contem elevados níveis de bilirrubina e muitos dos testes de automação são extremamente sensíveis 'a interferências de bilirrubinas. Estes calibradores também contem níveis variados de turbidez e muitos métodos são afetados por este interferente mesmo que em baixos níveis.

Conseqüentemente, se um método de algum fornecedor demonstrar uma interferência negativa para bilirrubina, o valor do calibrador é ajustado falsamente baixo. Desta maneira, a absorbância produzida pelo analito será fornecida e pacientes que não estiverem com a bilirrubina elevada serão mais corretamente mensurados.

Quando um calibrador com métodos específicos que tenham os valores "ajustados" for utilizado para calibrar um método livre de interferências, valores falsos de pacientes serão obtidos.

Os valores de controle de qualidade poderão estar errados também, dependendo da quantidade de interferentes presentes no soro controle.

Alguns fabricantes de calibradores com métodos específicos raciocinam que os valores também são específicos por instrumento. Contudo, os resultados obtidos por um instrumento são extremamente "método-dependente", a principal razão é devido aos efeitos das substancias cromáticas nos resultados.

Testes de Controle de Qualidade Externos

Os valores dos soros de avaliação externo refletem a media da quantidade de interferências cromáticas nos métodos utilizados. Bilirrubina e lipídios estão geralmente presentes como amostras separadas nas avaliações promovidas pelo CAP-USA. Se não fosse desta maneira , pouquíssimos laboratórios teriam concordância nos resultados devido aos efeitos variados das interferências cromáticas. Contudo, mesmo baixos níveis de turbidez afetam alguns métodos tradicionais.

É muito importante reconhecer que quando estes interferentes são eliminados com os métodos infravermelhos, um calibrador especifico deve ser utilizado.

Correção das interferências

Os métodos Synermed Infravermelho produzem desde