Principais vidrarias de laboratório (Acondicionamento e esterilização)

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Os materiais geralmente autoclavados são pipetas de vidro (com algodão onde colocamos o pipetador), béqueres e também algumas garrafas e meios de culturas resistentes a temperaturas de 180º C (garrafas quando são autoclavadas devem ter suas tampas levemente abertas para que dentro das mesmas também seja autoclavada), ponteiras e micropipetas, água, plásticos que podem ser autoclavados e algodão, no laboratório de cultura de célula utilizamos o papel kraft e barbante para acondicionar os materiais, (figura 1.2). Temos que verificar frequentemente se a autoclave está sendo eficiente à esterilização, para isso é colocado um indicador biológico que é frequentemente autoclavado com o material, este indicar consiste em tubo de cultura que contem uma ampola com meio estéril e uma fita de papel coberta de esporos, depois de autoclavada a ampola é quebrada em fluxo laminar e a cultura incubada por vários dias, se a bactéria não crescer no meio a esterilização foi realizada com sucesso. (PERES, 2005).

Também no laboratório como temos que utilizar tudo estéril, todo procedimento deve ser feito na câmara de fluxo laminar, (figura 1.3), um equipamento do laboratório que cria áreas estéreis para manipulação de matérias que não possam sofrer contaminação do meio ambiente.

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Figura1.1: Autoclave; Figura1.2:materiais acondicionados;

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Figura 1.3: câmara de fluxo laminar;

Alguns materiais que esterilizamos e utilizamos na cultura de células são:

- Almofariz com pistilo – Usado para tritura sólidos e na cultura de células é utilizado para macerar os tecidos e dissociar as células.

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- Balão de fundo chato – Usado para homogenizar soluções e aquecê-las.

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- Balão volumétrico – Usado para medir soluções.

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- Becker - Usado para misturar soluções e aquecê-las quando o mesmo é de vidro.

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- Dessecador- Usado para retirar a água ou líquido de algo.

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- Erlenmeyer- Usado para medir soluções e bom para aquecer soluções voláteis pela sua saída pequena.

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- Kitassato- usado em bomba para filtrar soluções.

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- Funil- Usado para filtrar e transferir soluções.

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- Pipeta graduada- Usada para medir soluções (medidas mais precisas) e transferi-las.

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- Proveta ou cilindro graduado- Usado para medidas precisas e tem de vários tamanhos e tipos.

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- Tubo de ensaio- Usado para colocar soluções.

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- Pipeta de Pasteur- Usado pra transferir líquidos e pode ser usado como conta gotas.

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- Placa de Petri- Usado para colocar meio de cultura e cultivo de microrganismo.

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- Bastão de vidro- Usado para misturar substâncias e soluções.

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- Frasco de vidro âmbar- Usado para colocar substâncias que não podem entrar em contato com a luz e para armazenar substâncias que degradam com a luz.

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2. Pratica II- Preparo de meio de cultura DMEM e PBS

2.1. Materiais e métodos:

2.2. Materiais:

- Pipetas de 10mL e 5 mL;

- Pipeta de Pasteur;

- Frasco de vidro âmbar;

- Frasco com tampa;

- Balança;

- Phmetro;

- Agitador magnético;

- Bomba de vácuo;

- Funil;

- Membrana de 0,22 um;

- Papel alumínio;

- Água destilada autoclavada;

- Meio de cultivo;

- Bicarbonato de sódio NaHCO3 (PM84,01);

- Solução antibiótico-antimicótica GibcoBRL;

- HCl 1N;

- KCL (PM 74,55);

- KHNPO4 (PM136,09) fosfato monofásico de potássio;

- NaCl (PM58,44) cloreto de sódio;

- Na2HPO4 (PM 141,96) fosfato dibásico de sódio anidro;

2.3. Métodos:

Foi realizado a preparação do meio de cultura (DMEM) para 2,32 g (1/6) do pacote.

*DMEM - esta é uma abreviatura do inglês Dulbecco/Vogt modified Eagle's (Harry Eagle) Minimal Essential Medium. O DMEM comercial é o meio utilizado para a maioria das células. Ele difere do meio original MEM, pois contém cerca de 4 vezes mais vitaminas e os aminoácidos do que as presentes na fórmula original, e alguns de 2 a 4 vezes mais glicose. Também contém ferro e outros adicionais. A maioria dos tipos de células humanas, de macaco, de hamster, de rato e galinha crescem bem neste meio.

Primeiramente pesou-se os materiais, 2,23 g de meio de cultivo e 0,62 g de bicarbonato de sódio (figura 2.3.1), e que foi colocado em potinhos feitos de papel alumínio, e em seguida dissolveu em água destilada o meio de cultivo e o bicarbonato de sódio enxaguando o potinho de alumínio várias vezes totalizando um valor