A Microbiologia

METODOLOGIA

AULA PRÁTICA:

MICROSCOPIA: A FRESCO

MATERIAIS:

Lâmina; Lamínula; Lápis; Alça; Álcool 70%; Papel toalha; Óleo de imersão; Microscópio.

PROCEDIMENTOS:

1. No dia anterior, realize o cultivo em meio líquido da bactéria de interesse;

2. Limpe cuidadosamente uma lâmina e lamínula com etanol 70% e identifique a lâmina com lápis na parte fosca;

3. Com auxílio da alça, coloque aproximadamente 25µl da cultura bacteriana na lâmina (± 3 alças);

4. Coloque a lamínula em cima da gota, tendo o cuidado de não pressionar o material biológico;

5. Coloque a preparação no microscópio e foque com a objetiva de menor ampliação;

6. Passe sucessivamente para a de maior ampliação, e quando usar a objetiva de 100x, coloque em cima da área a observar uma gota de óleo de imersão e ajuste novamente a focagem.

AULA PRÁTICA 2:

MICROSCOPIA: COLORAÇÃO DE GRAM

MATERIAIS:

Cristal violeta; Lugol; Álcool/Acetona 1:1; Fucsina; Bico de Bunsen; Lâmina; Lápis; Alça; Álcool 70%; Papel toalha; Óleo de imersão; Microscópio; Cronômetro.

PROCEDIMENTOS:

1. No dia anterior, realize o cultivo em meio líquido da bactéria de interesse;

2. Limpe cuidadosamente uma lâmina e lamínula com etanol 70% e identifique a lâmina com lápis na parte fosca;

3. Com auxílio da alça, coloque aproximadamente 25µl da cultura bacteriana na lâmina (± 3 alças);

4. Fixe o material celular com o calor, levando as lâminas à chama várias vezes, de modo a secar sem aquecer demais;

5. Cubra o esfregaço com solução de cristal de violeta durante 1 minuto;

6. Lave com água e cubra o esfregaço com solução de lugol durante 1 minuto;

7. Lave com água e lave o esfregaço com álcool/acetona rapidamente até deixar de sair corante;

8. Lave o esfregaço com água e cubra com solução de fucsina durante 30 segundos;

9. Lave com água, e deixe secar a lâmina a temperatura ambiente;

10. Observe em objetiva de 100x (com óleo mineral).

AULA PRÁTICA 3:

ESTRIA E LEITURA DE MEIOS SELETIVOS E DIFERENCIAIS

MATERIAIS:

Bico de Bunsen; Alça; Álcool 70%; Meios MacConkey, SS (Shigella e Salmonella), PIA (Pseudomonas Isolation Agar), Agar Sangue, LB (Luria bertani)

PROCEDIMENTOS:

1. Fazer a desinfecção da área de trabalho e anti-sepsia das mãos ANTES e DEPOIS de qualquer trabalho;

2. Trabalhar SEMPRE na área de segurança: uma área de aproximadamente 10cm