A OBTENÇÃO DE UM OGM DE MILHO TOLERANTE AO ESTRESSE HÍDRICO

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Os elementos genéticos de PV-ZMAP595 destinados à inserção no genoma de milho compreendido entre as bordas do T-DNA são, promotor (P-Ract1) que é organismo doado pela Oryza sativa (arroz), que tem uma sequência longa de 0,93kb. Um íntron I-Ract1 também organismo doado pela Oryza sativa este íntron é uma região do gene não traduzida que é removido pelo RNAm, uma sequência de codificação cspB (gene de proteína de choque frio) que é um dos genes de interesse, doado pelo organismo Bacillus subtilis que tem função de proteger as células dos danos causados pela formação de cristais de gelo durante o congelamento, possui também uma sequência de poliadenilação do gene terminador transcript 7 (T-tr7). Todos esses elementos juntos formam o cassete de expressão cspB que é seguida pelo cassete de expressão nptII. O último é cercado por dois sítios de recombinação (LoxP), e constitui um promotor CaMV 35S (P-35S-CaMV) que foi isolado do vírus do mosaico da couve-flor. Esse promotor é bastante utilizado na transformação da planta. A sequência de codificação nptII (gene de proteína Neomicina fosfotransferase II), que é outro gene de interesse implantado no genoma da planta, que é um organismo doado pela Escherichia coli – (ECOLX), esse gene nptII codifica uma enzima que fosforila a canamicina a qual confere resistência a este tipo de antibiótico, além disso possui uma sequência de poliadenilação do gene Nopaline synthase do gene terminador (T-nos). E a sequência do bacteriófago P1 para o local de recombinação reconhecido pela recombinase Cre (loxP).

- METODOLOGIA DE TRANSFORMAÇÃO

O milho foi desenvolvido através de transformação mediada por Agrobacterium spp. de embriões imaturos de milho com o plasmídeo PV-ZMAP595. A Agrobacterium spp. é uma bactéria encontrada no solo que induz a produção de tumores em plantas, isso por que ela tem um plasmídeo que transfere uma região de seu DNA para planta denominada T-DNA (DNA de transferência), o gene espB (expressa a proteína de choque frio B “CSPB”), introduzido no T-DNA por meio da tecnologia T-DNA recombinante, assim sendo cultura de Agrobacterium spp. contendo o gene de interesse T-DNA de seu plasmídeo são incubadas com explantes da planta a ser transformada e durante o período de incubação que o T-DNA e Transferido para o genoma da planta.

Por meio de técnicas de cultura de tecido estes explantes transformados iram dar origem a uma planta transgênica completa por um processo denominado regeneração de plantas. A Agrobacterium spp. constitui um sistema natural de transformação de planta é atualmente o método mas utilizado pela biotecnologia embora não seja capaz de transmitir gene a todas as espécies.

- DESEMPENHO AGRONÔMICO

O milho tolerante ao estresse hídrico foi comparado com o milho convencional e alguns milhos híbridos comerciais, onde foram todos os tratamentos submetidos a diferentes situações de estresse hídrico, para se ter uma comparação para verificar se obteve diferença entre os demais tratamentos. O experimento foi colocado a campo através de blocos ao acaso, e submetido a teste de Tukey ao nível de 5% de probabilidade, para verificar se o novo híbrido se diferenciava estatisticamente dos demais tratamentos. Os fatores comparados foram os componentes de rendimento, aonde em ambos se obteve diferença e na produtividade se teve o objetivo alcançado que era um aumento 15% na produtividade sobre estresse hídrico.

Este experimento foi realizado em três estados, Paraná, Santa Catarina e Rio Grande do Sul, e várias cidades desses estados. As repetições fora sob três anos consecutivos e todos estes experimentos se obtiveram diferença nos tratamentos realizados, com um sucesso nesse novo híbrido.

As características do híbrido são tolerância e não resistência ao estresse hídrico, ou seja, ele suporta por um tempo maior sob condições de falta de água e consegue ter menor prejuízo em seus componentes de rendimento comparado aos demais, em condições normais ele possui uma capacidade de produção, mais elevada que os demais desde que supridas suas necessidades fisiológicas, esse novo hibrido é recomendado tanto para locais e anos que o clima desfavorece ocasionando risco de estresse hídrico quando para produção sobre ambientes favoráveis, em ambos ele mostrara resultados superiores de produtividade.

- SEGURANÇA HUMANA E SEGURANÇA ANIMAL

A caracterização apresentada no “Relatório de Biossegurança Alimentar do milho MON 87460” confirmou a segurança do evento para ser utilizado na alimentação humana e animal. Os testes para a avaliação da biosseguridade do referente evento tiveram se basearam nas seguintes metodologias: Caracterização das propriedades físicas, químicas e funcionais das proteínas; Quantificação da expressão das proteínas em diferentes tecidos da planta; Avaliação da similaridade das proteínas com substancias biologicamente ativas que possam ter efeitos adversos para mamíferos; Avaliação da digestibilidade em fluídos gastrointestinais simulados; Histórico documentado do consumo seguro das proteínas ou dos homólogos que não possuem efeitos adversos documentados para a saúde humana e animal; Avaliação potencial de toxicidade para mamíferos através de resultados obtidos pela administração forçada. Os resultados obtidos indicaram que as proteínas CSPB e NPTII são seguras para o consumo humano e animal.

As proteínas CSPB e NPTII não possuem qualquer similaridade com sequencias de aminoácidos com alérgenos conhecidos ou proteínas toxicas que causam danos à saúde humana ou animal. Tais resultados foram constatados através de ferramentas de bioinformática. Ainda, as proteínas são rapidamente digeridas nos sistemas gastrointestinais de mamíferos o que torna desprezível a probabilidade causarem alergias. A avaliação de toxicidade oral aguda em camundongos evidenciaram que as proteínas não têm toxicidade oral aguda e nenhum efeito adverso, mesmo sendo ministradas altas doses. Possíveis efeitos deletérios do OGM não são esperados em caso de animais gestantes já que as proteínas são de rápida digestibilidade e não produzem efeitos adversos em animais prenhes e sua progênie.

Foi realizada uma detalhada avaliação nutricional do milho MON87460 comparado com o milho convencional e com outros híbridos comerciais a qual demonstrou que o milho MON 87460 é tão seguro e nutritivo quanto o milho convencional. Os testes foram realizados utilizando amostras geradas a partir de seis locais diferente nos Estados Unidos na safra de 2006. O milho foi aprovado em