RELATÓRIO EXTRAÇÃO DNA

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- Terceira etapa: PRECIPITAÇÃO DO DNA

Nessa etapa foi realizada a adição de dois volumes de etanol absoluto (aproximadamente 220 μL) no novo microtubo, ele foi agitado até acarretar a precipitação, formando uma “nuvem” de DNA. Após isso o microtubo foi centrifugado (10.000 rpm por 10 min.), fazendo com que o DNA ficasse aderido ao fundo e o sobrenadante pudesse ser desprezado.

- Quarta etapa: REIDRATAÇÃO DO DNA

Por fim, foi adicionado ao DNA o solvente TE (100 μL), que serve como um tampão de conservação e o microtubo levado para a geladeira para o seu armazenamento.

RESULTADOS

O procedimento para obtenção da amostra de DNA foi realizado com sucesso por todos os integrantes do grupo, sendo posteriormente feita a quantificação do DNA com Espectrofotômetro A260. Para a leitura foi utilizada 499 μL de H2O e 1μL da amostra de DNA. A absorbância se deu nos comprimentos de 260 nm e 280 nm. Após a obtenção dos valores da leitura foi realizado o cálculo para determinar a concentração de DNA na amostra. O cálculo ocorre a partir da seguinte equação:

DNA [ ] μg/μL = OD260 x F.D x 50 (μg/mL)

1000

A mesma foi simplificada e aplicada por: OD 260x 25 e os resultados obtidos por cada integrante do grupo foram:

ABSORBÂNCIA

MÉDIA

ALÉXIA

0,043

0,6875

0,012

ENZO

0,040

0,5625

0,005

JULIA

0,015

0,2625

0,006

Na análise do resultado obtido, pode-se calcular a pureza, no qual se divide os valores obtidos no espectrofotômetro para os comprimentos de onda de 260nm (numerador) e 280nm (denominador) um pelo outro. O valor ideal para a concentração de DNA deve estar entre 1,6 e 2. Valores maiores indicam contaminação proteica e valores menores indicam contaminação com álcool.

A pureza obtida na amostra de cada aluno foi:

- Aléxia:

Tubo 1: 1,0

Tubo 2: 1,1

- Enzo:

Tubo 1: 1,0

Tubo 2: 0,7

- Julia:

Tubo 1: 1,0

Tubo 2: 0,66

A análise qualitativa em gel de agarose mostrou que nenhuma das purezas atingiu o valor considerado ideal que está entre 1,6 e 2. Sendo assim, podemos inferir que todas as amostras estão contaminadas com álcool.

CONCLUSÃO

Na aula prática de Biologia Molecular extraímos DNA de sangue humano. Na qual aprendemos a importância da utilização de reagentes como o NONIDET p-40 com função de romper as membranas citoplasmáticas, mantendo a integridade da molécula de DNA. Também observamos a precipitação de DNA que é a formação de pellet com a adição de TKM1. Deste modo, podemos realizar a análise espectrofotométrica para quantificar o DNA (concentração em μg/mL).

Com a prática concluímos que a extração de DNA foi um procedimento realizado com êxito por todos participantes do grupo. Entretanto, a análise qualitativa da amostra de DNA não teve o resultado esperado, pois o grau de pureza não foi atingido, significando que as amostras estavam contaminadas com álcool.

A realização de aulas práticas como esta é de extrema importância para o estudo de técnicas de extração de DNA, que são necessárias na realização de pesquisas e estudos na área da Medicina e da Biologia Molecular.

PERGUNTAS E RESPOSTAS EXTRAÇÃO DO DNA

Para que se extrai o DNA?

A extração de DNA é necessária para várias aplicações na biologia molecular como o sequenciamento de genes e diagnóstico de doenças hereditárias, identificação de impressões digitais do material genético, detecção e diagnóstico de doenças infecciosas, entre outros.

Qual a função do Nonidet na extração do DNA a partir de sangue periférico?

Ele desnatura as membranas lipídicas e as proteínas, desintegrando os núcleos e fazendo com que DNA se separe do restante da célula.

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