Determinação de ácido hipúrico em urina por HPLC

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- Descrição do procedimento

1) Amostra – Tratamento

- 1 mL de urina + 1 mL de etanol em tubo de centrífuga

- Homogeneizou-se

- Centrifugou-se a 2000 rpm por 15 minutos

- Injetou-se 20 µL do sobrenadante no HPLC

2) Condições do HPLC

- Fase móvel: água/ metanol/ ácido acético ( para 1 L = 792/200/8 )

- Vazão: 1,3 mL/min

- C. onda = 257 nm

3) Calibração

Fez-se cada calibrador em duplicata.

- C1: 0,1 mg/mL ( adicionar 100 µL do padrão 2 a 5 ml de urina ) - homogeneizou-se no sonicador, por 10 minutos.

- C2: 0,5 mg/mL ( adicionar 50 µL do padrão 1 a 5 mL de urina ) - homogeneizou-se no sonicador, por 10 minutos.

- C3: 1,0 mg/ml ( adicionar 100 µL do padrão 1 a 5 mL de urina ) - homogeneizou-se no sonicador, por 10 minutos.

4) Padrão de AH

- Solução 1 (50 mg/mL): Dissolveu-se 0,2525 de HÁ (Sigma,99%) em 5 mL de metanol. Sonicou por 10 minutos e deixou a 4°C.

- Solução 2 (5mg/mL): Diluiu na proporção de 1:10 (balão de 10 mL) da solução 1.

RESULTADOS E DISCUSSÕES

- Média dos valores dos calibradores e do branco

Branco

1827452,5

Cal 1

2189795,25

Cal 2

3534884

Cal 3

5344252

[pic 1]

Ac1 = A branco – A c1’

Ac1 = 1827452,5 - 2189795,25

Ac1 = 362342,75

Ac2 = A branco – A c2’

Ac2 = 1827452,5 - 3534884

Ac2 = 1707432

Ac3 = A branco – A c3’

Ac3 = 1827452,5 - 5344252

Ac3 = 3516799,5

Amostra 1

- y = 1E+06 x + 250224

2989946 = 1E+06 x + 250224

x = 2739722

1E+06

x = 2,73

- y = 1E+06 x + 250224

2941430 = 1E+06 x + 250224

x = 2691206

1E+06

x = 2,69

[pic 2]

Média = 2,71

Desvio padrão = 0,028

CV= 1,04

2,71 mg AH/L ------- 1,2 g/L creatinina

x ------- 1,0 g/L creatinina

[pic 3]

x = 2,25 mg AH/g creatinina

Amostra 2

- y = 1E+06 x + 250224

4899786 = 1E+06 x + 250224

x = 4649562

1E+06

x = 4,64

- y = 1E+06 x + 250224

4934571 = 1E+06 x + 250224

x = 46843467

1E+06

x = 4,68

[pic 4]

Média = 4,66

Desvio Padrão = 0,028

CV = 0,61

4,66 mg AH/L ------- 1,2 g/L creatinina

x ------- 1,0 g/L creatinina

[pic 5]

x = 3,88 mg AH/g creatinina

CONCLUSÃO

De acordo com o valor de referência ( 1,5 g AH/g creatinina ) e do IBMP ( 2,5 g AH/ g cretinina) nota-se que individuo da amostra 1 está exposto mas não ocupacionalmente já