Relatório Extração de DNA da Cébola

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Passado o tempo determinado, retiramos o Becker e aguardamos seu resfriamento no gelo durante 5 minutos ainda pressionando constantemente a mistura contra as paredes do recipiente de vidro com um bastão de vidro. Por fim, filtramos a mistura, utilizando tripé, funil e o papel filtro, e evitando que a espuma na superfície do líquido não contaminasse a filtrada.

- Precipitação do DNA

Colocamos cerca de 5mL do extrato de cebola adquirido no fim da filtração em um tubo tipo Falcon de 15mL. Inclinamos o tubo de ensaio e derramamos, com cuidado, 5mL de etanol gelado a 95% na parede do tubo e deixamos repousar durante 25 minutos. Por fim, observamos a zona criada entre as duas soluções, o extrato e a solução alcoólica, onde encontramos o DNA, em uma precipitação esbranquiçada.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

O uso da cebola para a prática é justificado devido a grandeza de suas células, que quando picadas, rompem-se facilmente, liberando seu material intracelular e ácidos nucleicos facilitando o processo de separação e agregação do DNA conforme mostrado na figura?. Sua maceração servirá para romper a parede celular e liberar o conteúdo citoplasmático.

A solução de NaCl + detergente + água, também conhecida como solução de lise celular, foi preparada para degradar e romper as membranas celulares, tanto a plasmática como a nuclear, das células para assim terem seu conteúdo liberado no meio, vide figura?. Foi importante uma agitação moderada dessa mistura para não ocorrer a formação de espuma, que posteriormente poderia atrapalhar o processo de separação do DNA.

O aquecimento em banho-maria por 15min a 60 ºC favorece a desnaturação das moléculas de DNA (abertura das fitas duplas), devido a desintegração pelo detergente dos núcleos e cromossomos da célula. E promove agitação das moléculas, facilitando a ação do detergente em desestabilizar as membranas lipídicas. A alta temperatura também ajuda a inativar enzimas que podem degradar o DNA, além de degradar a parede celular e lisar as células vide figura?.

A constante agitação tem como função a separação das organelas membranosas de acordo com sua concentração na célula conforme mostra figura?.

O processo de filtração objetivou separar os pedaços da cebola da solução aquosa conforme visto na figura?.. Se houvesse a permanência dos fragmentos, a junção do DNA ficaria comprometida.

O resfriamento do filtrado no gelo permitirá a precipitação do DNA como observado na figura?.

Houve a formação de duas fases, um inferior aquoso e a superior alcoólica conforme com os fragmentos de DNA decantados no fundo do tubo mostrado na figura?.

A estrutura de dupla-hélice só pode ser visualizada de modo indireto e através de aparelhos sofisticados. O que você está observando são milhares de fitas de DNA juntas.

CONSIDERAÇÕES FINAIS

Com o fim da prática, pudemos concluir que as moléculas de DNA foram extraídas através de um método simples onde usamos o detergente para romper a membrana citoplasmática obtendo o DNA da cebola liberado no suco após o aquecimento e que quando colocamos o etanol houve a separação devida suas densidades, já que o álcool flutua com as proteínas, enquanto a lise-detergente precipita o DNA.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

JUNQUEIRA, L. C.; CARNEIRO J. Biologia Celular e Molecular. Rio de Janeiro: 8ª ed. Guanabara. 2005.

ALBERTS, Bruce et al. Biologia molecular da célula. 5.ed. Porto Alegre: Artmed, 2008.

GRIFFITHS, Anthony J. F et al. Introdução à genética. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2013.

APÊNDICES/ANEXOS

- Fotos

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- Questões

1ª) Qual a função do NaCl na extração?

A adição do sal (NaCl) no início da experiência proporciona ao DNA um ambiente favorável. O sal contribui com íons positivos e negativos. Os positivos neutralizam a carga negativa do DNA, e os negativos as histonas, permitindo que o complexo DNA + Histonas não se repila mais e então se enovele. Se não fosse a presença do sal, ele poderia desintegra-se. Um outro fato, é que o sal aumenta a densidade do meio, o que facilita a migração do DNA para o álcool.

2ª) Porque a cebola é um ótimo material para extração do DNA?

Devido seu maior tamanho celular, que ao serem cortadas, liberam facilmente seu conteúdo intracelular.

3ª) Por que se deve usar detergente para extração?

O detergente afeta a permeabilidade das membranas, que são constituídas, em parte, por lipídeos. Com a ruptura