Prática 1 – Ensaio de fitotoxicidade em alface (Lactuca sativa)

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Fonte: O autor.

A avaliação eco toxicológica é um dos parâmetros mais importantes a ser

monitorado durante o tratamento de resíduos líquidos. Segundo a resolução n° 357 de

17 de março de 2005 do CONAMA, os efluentes antes de serem lançados nos rios

devem ser submetidos a testes eco toxicológicos para a verificação dos parâmetros

estabelecidos na resolução.

2. Objetivos

• Avaliar a toxicidade de águas e efluentes pela resposta de crescimento de

sementes de alface.

3. Materiais

• Amostra investigada;

• Cloreto de Sódio (NaCl);

• Água mineral;

• Placas de petri;

• Pipeta volumétrica;

• Balão volumétrico;

• Proveta;

• Balança analítica;

• Câmara de germinação a 22 °C;

• Papel filtro, algodão, tesoura, filme plástico.

4. Procedimento

Preparo da amostra

Primeiramente, cada amostra deverá ser diluída nas concentrações que se deseja

testar. Como controle negativo é utilizado água mineral.

Para ensaios com efluentes

• Será necessário 500 mL de amostra de efluente para a realização deste teste;

• Para cada amostra serão testadas 5 concentrações (0, 25, 50, 75 e 100% de

efluente), sendo a concentração “0%” o controle negativo, apenas com água

mineral e o “100%”, o efluente puro;

• Desta forma, 5 concentrações em 3 repetições, logo, serão necessárias 15

placas de petri para cada uma das amostras;

• A partir do efluente puro, preparar em balões de 50 mL as diluições para obter

concentrações de 0, 25, 50, 75 e 100% do efluente, seguindo o procedimento;

• Controle negativo (0%): Água mineral pura;

• Concentração 25%: Adicione 12,5 mL de efluente em um balão volumétrico de

50 mL e complete o volume com água mineral;

• Concentração 50%: Adicione 25 mL de efluente em um balão volumétrico de 50

mL e complete o volume com água mineral;

• Concentração 75%: Adicione 37,5 mL de efluente em um balão volumétrico de

50 mL e complete o volume com água mineral;

• Concentração 100%: Efluente puro;

• Identifique cada balão com a sua respectiva concentração;

• Identifique também as placas de Petri que serão utilizadas, serão 3 placas para

cada concentração. Identifique com a concentração e o número do grupo;

• Em cada uma das placas de Petri identificadas, corte um papel filtro do tamanho

da placa e coloque dentro da mesma;

• Em seguida, adicione 4 mL da solução sobre o papel filtro em cada uma das

placas identificadas com a concentração correspondente;

• Em cada uma das placas, coloque 10 sementes de alface (Lactuca sativa) de

forma que fiquem bem distribuídas sobre o papel filtro humedecido;

• Cubra cada uma das placas com filme de PVC para não perder umidade;

• Em seguida, incube as placas a 22 °C, sem luz, por 7 dias;

• A leitura será realizada ao final do tempo de incubação.

Obs.: É possível que as concentrações testadas não sejam adequadas, necessitando

preparo de outras concentrações mais diluídas.

Para ensaios com NaCl

• Pese 2,922 g de NaCl e transfira para um balão volumétrico de 250 mL;

• Adicione no balão, com o NaCl, 50 mL de água mineral e solubilize o sal;

• Em seguida, complete o volume do balão com água mineral. Esta solução terá

concentração de 0,2 M e será a solução padrão;

- A partir da solução padrão, preparar em outros balões de 50 mL as diluições para

obter concentrações de 0,010 M, 0,025 M, 0,040 M, 0,055 M, 0,070 M e 0,1 M, seguindo

o procedimento;

• Solução 0,010 M: Pipetar 2,5 mL da solução padrão e completar o volume com

água;

• Solução 0,025 M: Pipetar 6,25 mL da solução padrão e completar o volume com

água;

• Solução 0,040 M: Pipetar 10 mL da solução padrão e completar o volume com

água;

• Solução 0,055 M: Pipetar 13,75 mL da solução padrão e completar o volume

com