Lectina Proteina ou Glicoproteina

...

Aglutinina Galanthus nivalis (GNA) foi o primeiro monocot isolado

lectina que confere propriedades de resistência à manose de ligação a SAP-

sucção ou homopteran pragas. Dutta et al. (2005) relataram que

quando o gene para monocotiledónea ASAL manose de ligação é expressa,

mostarda pode suportar parcialmente ataque de pulgões. Aqui nós descrevemos

a clonagem e caracterização molecular do gene da lectina

de Allium sativum, o estudo destina-se a verificar a sua inseto

potencial de resistência quando transferido para o algodão. O estudo

foi baseada no relatório que a caracterização e clonagem de mais

genes dentro da família de super MMBL será útil para

estendendo os recursos de genes usados ​​na engenharia genética para volvimento

mento de transgênico resistente a insetos.

1567-1348 / $ - ver matéria frente Ó 2012 Elsevier BV Todos os direitos reservados.

http://dx.doi.org/10.1016/j.meegid.2012.05.008

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(NB Afolabi-Balogun).

Infecção, Genética e Evolução 12 (2012) 1508-1512

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Infecção, Genética e Evolução

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2. Materiais e métodos

2.1. Material vegetal

Os dentes de alho (Allium sativum Linn) foram obtidos a partir de

o Instituto de Investigação Agrária, Samaru em Zaria, na Nigéria.

2.2. Produtos químicos e reagentes

Fornecido por Qiagen GmbH, Alemanha, Fermentas Ciências da Vida,

Invitrogen e Sigma empresa de produtos químicos.

2.3. Isolamento de ARN total

O RNA total foi extraído usando um kit Qiagen planta RNesy (Qia-

gen, Alemanha) de acordo com as instruções do fabricante. o

O RNA foi então purificado do ADN genómico de contaminação antes da armazenagem

ção a -20 ° C (a curto prazo) e -70 ° C (a longo prazo).

2.4. Tratamento DNase usando TURBO livre de DNA ™ (Ambion)

O tratamento foi realizado de acordo com o fabricante do

instrução com ligeiras modificações. Aproximadamente 20

eu

RNA g

foi usado em um 20

eu

l reacção contendo 0,1 volume de 10 Â ADNase

tampão, 1.5

eu

l (3 L) Turbo ADNase. A mistura reaccional foi depois incu-

bated a 37 ° C durante 30 min. Ressuspensas reagente inativação DNase

(0,2 de volume) foi depois adicionado e misturado. A mistura foi incu-

bated à temperatura ambiente durante 2 min, com mistura ocasional a

ressuspender o reagente de inactivação de DNase. O tubo foi então cen-

trifuged a 10.000 g durante 1,5 min e o ARN foi transferido para

tubo de microcentrífuga fresco. O sobrenadante foi analisado para a pressão

cia de ADN contaminante por quantificação de agarose, RT-PCR

de ARNm utilizando iniciadores específicos de lectina e comparando com a convenção

cional de PCR com o mesmo iniciador.

2.5. Nanodrop quantificação

A quantificação de ADN purificado foi feito spectrophotometri-

camente usando Nanodrop espectrofotômetro.

2.6. Reacção em cadeia da polimerase (PCR)

Kit de PCR de alta fidelidade (Promega) foi usado em uma reacção de contenção

ção 20 ng de molde de ARN total. O programa geral PCR foi pré-

cedido por um passo de desnaturação de 2 min (94 ° C). Posteriormente cada

ciclo de 30 s período de desnaturação (94 ° C) seguido por um 30 s de recozimento

períodos a 62 ° C, o DNA foi estendido a 72 ° C durante 7 min antes

As amostras foram então mantidas a 4 ° C durante 1 h.

2.7. Reacção em cadeia da polimerase de transcrição reversa (RT-PCR) usando

Carboxydothermus hydrogenoformans polimerase de um passo de RT-PCR

sistema

Um passo de desnaturação