Relatírio de ph otimo enzimatico

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Para obter os resultados de atividade da enzima 〈-amilase comercial em U/mL, os seguintes cálculos foram realizados:

- Para pH 2,6:

- Abs controle – Abs amostra = X

1,450 – 1,208 = 0,242

1 unidade atividade ---- 0,001 absorbância

U ---- 0,242

Y = 242 U

- Considerando a diluição da solução de 〈-amilase de 1:1000:

242 U x diluição = 242 x 1000 = 242.000 unidades de atividade

- Considerando que uma unidade de atividade foi definida como a diminuição de 0,001 de absorbância por minuto de reação por mL de enzima comercial utilizada, e sendo o tempo de reação de 5 minutos:

242.000 U --- 5 minutos

Z --- 1 minuto

Z = 48.400 unidades de atividade

- Considerando que uma unidade de atividade foi definida como a diminuição de 0,001 de absorbância por minuto de reação por mL de enzima comercial utilizada, e sendo que foi utilizado 0,1 mL de solução de amilase na reação:

48.400 U--- 0,1 mL

X --- 1 mL

X = 484.000 unidades de atividade de 〈-amilase

(U/mL de enzima comercial)

Os cálculos foram feitos de maneira análoga para os demais pH e seus resultados foram expressos na tabela 1.

A % de atividade relativa foi encontrada determinando a máxima atividade de 〈-amilase como 100%, e as demais como uma proporção desta. Estes resultados também estão apresentados na tabela 1.

Muitas enzimas apresentam um pH ótimo, determinado a partir de uma curva do efeito do pH na atividade enzimática, como a curva abaixo, que foi obtida experimentalmente.

Figura 1: Curva de pH ótimo da enzima α- amilase.

[pic 1]

Como podemos observar, no caso da α- amilase, a faixa de pH de máxima atividade manteve-se alta na faixa de pH de 4-9, sendo a maior delas em pH 6. Ou seja, isso indica que não existe um único valor de pH ótimo, mas uma faixa de pH ótimo.

A influência do pH na catálise enzimática está correlacionada com o estado de ionização de resíduos de aminoácidos da enzima que são essenciais à catálise. Assim, sua atividade vai depender de como os sítios ativos da enzima estarão ionizados determinando a atividade ou inatividade da enzima.

Segundo Carvalho (2007) os resultados obtidos por Asgher et al. (2007) mostraram que a α-amilase produzida pelo Bacillus subtilis JS-2004 foi ativa numa vasta faixa de pH, sendo 8,0 o pH ótimo da respectiva enzima.

Estudos realizados por Bernhardsdotter et al. (2005) também mostraram que a amilase exibiu uma grande atividade em ampla faixa de pH, que variou de 5,5 a 11,0, apresentando cerca de 80% de atividade em valores de pH 6,1 e 10,9. (CARVALHO, 2007)

Por outro lado, Sajedi et al. (2005) concluíram que o pH ótimo da α- amilase secretada por Bacillus sp. KR-8104 estava entre 4,0 e 6,0, com atividade em pH variando de 3,5 a 7,0. α-Amilases do gênero Bacillus têm sido descritas por vários autores em relação a sua atividade ótima em valores de pH baixo, desde 3,5 até valores mais altos como 12. (CARVALHO, 2007).

Conclusão

Diante dos resultados obtidos em aula e os encontrados em vários estudos citados por Carvalho (2007), pode-se verificar que a enzima α-amilase pode apresentar uma ampla faixa de pH ótimo, dependendo das cepas das quais foram obtidas, no caso da enzima bacteriana, como a enzima comercial usada na aula prática. Porém, esses valores de maior atividade tendem a ser mais próximos do pH neutro.

Bibliografia

NELSON, David L, COX, Michael Princípios de Bioquímica de Lehninger. 3. ed. São Paulo, SP: Artmed, 2002.189 p.

CARVALHO, R. V. D. Produção e caracterização de α-amilase por Bacillus sp. SMIA-2 termofílico utilizando proteínas do soro de leite, e algumas aplicações da enzima. Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro. Campo dos Goytacazes - RJ. 2007.