Relatório PCR Real Time

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O clorofórmio é utilizado tipicamente, para que ocorra a separação em fase aquosa e orgânica, através da centrifugação, permanecendo o RNA na fase aquosa e o DNA em fase orgânica (SILVEIRA, 2010).

As reações quantitativas são muito utilizadas para a determinação de genes específicos e também em técnicas diagnósticas, realizadas com o intuito de se saber a quantidade inicial de RNA ou DNA (OLIVEIRA et al., 2007). Foram demonstrados dois métodos de quantificação, a espectrofotometria, técnica empregada em equipamentos como o NanoDrop, ou por fluorescência, uma técnica mais precisa e específica em seus resultados. Porém o ideal para se ter um bom padrão de quantificação é se realizar os dois métodos, para se ter a certeza dos resultados.

A quantificação Absoluta está relacionada com o número inicial de cópias de um determinado DNA ou RNA através da análise de uma curva padrão de concentração conhecida. Já a Quantificação Relativa analisa as alterações na expressão gênica de uma determinada amostra, comparando os resultados com os de uma amostra de referência, normalmente constituída por genes endógenos, (método ΔCt) (BARROS;OLIVEIRA;MARIN, 2008).

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CONCLUSÃO

O PCR real time é um aprimoramento da técnica de PCR convencional, que permite o acompanhamento do processo, tornando-se uma técnica muito utilizada pela exatidão de seus resultados em um período de tempo menor, sem a interferência do meio externo.

REFERÊNCIAS

SILVEIRA, Mauren C.A. Procedimento em técnicas laboratoriais vegetais. 2010. Disponível em: http://pt.scribd.com/doc/134213480/Apostila-Tecnicas-de-Extracao-de-RNA-DNA-e-Proteinas-Revisada#scribd. Acesso em: 24 out. 2015.

OLIVEIRA, Márcia Cristina de Sena; REGITANO, Luciana Correia de Almeida; ROESE, Alexandre Dinnys; ANTHONISEN, Denilson Gouvêa; PATROCÍNIO, Epaminondas do; PARMA, Márcia Maria; SCAGLIUSI, Sandra Maria Mansur; TIMÓTEO, Wilston Henrique Belem; JARDIM, Silvia Neto. Fundamentos teórico-práticos e protocolos de extração e de amplificação de DNA por meio da técnica de reação em cadeia da polimerase. 2007. Disponível em: http://www.alice.cnptia.embrapa.br/bitstream/doc/48295/1/LivroProtMolecular.pdf. Acesso em: 24 out. 2015.

BARROS, Natália Eudes Fagundes de; OLIVEIRA, Edna Maria Morais; MARIN, Victor Augustus. 2008. Aplicabilidade da metodologia de reação de polimerase em cadeia em tempo real na determinação do percentual de organismos geneticamente modificados em alimentos. Disponível em: http://www.scielo.br/scielo.php?pid=S1415-52732008000100009&script=sci_arttext. Acesso em: 24 out. 2015.