Atividade de composto de paládio
Por: eduardamaia17 • 26/12/2017 • 3.710 Palavras (15 Páginas) • 429 Visualizações
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nanomolares, enquanto amastigotas intracelulares
foram mortos em drogas As concentrações 10 vezes menos tóxico
do que aqueles indicados para macrófagos. L. (L.) ratinhos BALB / c
infectados com amazonensis tratada
por injecção intralesional de DPPE 1,2 exibiram uma significativa
diminuição de tamanhos lesão no pé e uma redução de 97% das
parasita encargos em relação aos controles não tratados.
As experiências adicionais indicaram a inibição do
atividade B catepsina de L. (L.) amazonensis amastigotas por
DPPE 1.2. Mais estudos são necessários para explorar a
potencial de DPPE1.2as uma opção adicional para o
quimioterapia de leishmaniose.
Methods
Animals
hamsters dourados fêmea com oito semanas de idade foram obtidos a
partir de plantéis mantido na Universidade de Campinas (São
Paulo, Brasil) e fêmea BALB / c de 6 a 8 semanas de idade eram
adquirida pela Universidade Federal de São Paulo (São Paulo,
Brasil). Este estudo foi realizado em estrita conformidade com a
recomendações do Guia para o Cuidado e Uso de
Animais de Laboratório do Conselho Nacional de animal
Experimentação (http://www.cobea.org.br). O protocolo foi
aprovado pela Comissão de Ética de Experimentação Animal
do Comitê de Cuidado e Uso Institucional Animal da
Universidade Federal de São Paulo (Id # CEP 1844/08).
Parasites
A cepa L. (L.) amazonensis utilizado (MHOM / BR / 1973 / M2269)
foi gentilmente cedido pelo Dr. Jeffrey J. Shaw, Instituto Evandro
Chagas, Belém, Pará, Brasil e mantida como amastigotas por
inoculação em footpads de hamsters dourados cada 4 a 6 semanas.
amastigotas suspensões foram preparadas por homogeneização de
lesões excisadas, perturbação por quatro passagens através de calibre 22
agulhas, e centrifugação a 2506g durante 10 min; o resultado
sobrenadante foi centrifugado a 1,4006g durante 10 minutos, e o sedimento
foi ressuspenso em RPMI 1640. A suspensão foi mantida sob
agitação durante 4 h à temperatura ambiente e centrifugou-se a 2506g
durante 10 min. O sedimento final continha amastigotas purificadas que
eram essencialmente isento de contaminação por outras células [22].
L. (L.) promastigotas amazonensis foram cultivadas a 26uC em M199?
(Gibco) suplementado com bicarbonato de sódio 4,2 mM,
4,2 mM de HEPES, 1 mM de adenina, 5 mg / ml de hemina (tipo I bovino)
(Sigma, St. Louis, MO, EUA) e 10% de soro fetal de vitelo (FCS)
(Cultilab, SP, Brasil).
Biphosphinic palladacycle complex [Pd(C2,
N-S(-)DMPA)(DPPE)]Cl (DPPE 1.2)
O composto de paládio DPPE 1,2 (Figura 1) foi obtido
a partir de N, N-dimetil-1-fenetilamina (DMPA), complexado com um, 2-
etano-bis (difenilfosfina) ligando (DPPE) e sintetizado como
previamente descrito [16]. As soluções de reserva foram mM at1.45
preparadas em dimetilsulfóxido (DMSO); Para utilização in vitro, a droga
Diluiu-se até à concentração apropriada em cultura de células
médio, e para em injeções vivo o estoque foi diluído em PBS.
Figure 1. Structure of the DPPE 1.2 compound [Pd(C2, N-S(-)DMPA)(DPPE)]Cl.
doi:10.1371/journal.pntd.0001626.g001
www.plosntds.org 2 May 2012 | Volume 6 | Issue 5 | e1626
Palladacycle Activity on Leishmania
Effect of DPPE 1.2 on L. (L.) amazonensis promastigotes
and intracellular amastigotes
As culturas em promastigotas 1x106 parasitas / ml foram mantidos
em meio de cultura 199, como descrito acima, contendo entre 1,25 nM
e 150 nM de DPPE 1.2. Parasitas foram contados diariamente em uma
câmara de Neubauer durante três dias. O efeito leishmanicida de
DPPE 1.2 em amastigotas intracelulares foi avaliada em rato de medula
óssea derivada macrófagos infectados com L. (L.) amazonensis.
Osso macrófagos derivados de medula foram gerados a partir de células
estaminais de medula óssea isoladas a partir de ratinhos BALB / c [23].
As células foram contadas, adicionadas (86105) e cultivadas em lamelas
de vidro inseridas em placas de 24 poços de cultura de tecidos contendo
meio RPMI 1640 tamponado com
15 mM de HEPES, 20 mM de bicarbonato de sódio e completada com
1 mM de L-glutamina, 20% de soro fetal de vitelo (FCS) and30% meio
condicionado das células L929 (LCCM). As culturas foram mantidas
a 37uC, numa atmosfera de ar / CO2 (95/5%). Após 5 dias, o meio foi
mudado para meio RPMI
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