Efeito do pH na Atividade de Enzimas Catalíticas
Por: Hugo.bassi • 16/3/2018 • 1.164 Palavras (5 Páginas) • 464 Visualizações
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Feito isso, o espectrofotômetro foi calibrado, ajustando o zero de absorbância com a solução do tubo “branco” e mediu- se a absorbância dos tubos teste e controle a 620 nm.
IV. Resultados:
A absorbância das amostras medidas no espectrofotômetro a 620 nm foi:
Efeito do pH na Atividade da α-Amilase Bacteriana
Tampões
Abs 620 nm
Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 2,6
1,717
Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 3,0
1,842
Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 4,0
1,306
Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 5,0
0,331
Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 6,0
0,090
Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 7,0
0,105
Borato 0,1 Mol/L pH 8,0
0,247
Borato 0,1 Mol/L pH 9,0
0,358
Borato-NaOH 0,1 Mol/L pH 10,0
0,843
Borato-NaOH 0,1 Mol/L pH 11,0
0,631
Tubo controle
2,130
Para calcular os valores de atividade de α-amilase (U/mL de enzima comercial) foi utilizada a seguinte fórmula:
Atividade = Unidade ÷ 0,001 de absorbância ÷ 5 min ÷ 0,1mL x fator de diluição
Dado que:
- O fator de diluição utilizado peço grupo 4 foi de 1:12
- Unidade= Controle – Absorbância
Para o cálculo da atividade relativa foi feita uma regra de três, em que a atividade de α-amilase encontrada é 100% e a absorbância medida é x %.
Exemplo: Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 2,6
68,83 --------- 100%
1,717 --------- x
x= 2,494 %
Fazendo-se os cálculos, foram obtidos os valores que estão expostos na tabela a seguir:
Efeito do pH na Atividade da α-amilase bacteriana
Tampões
Abs 620 nm
Unidades de Atividade de α-amilase (U/mL de enzima comercial)
% Atividade Relativa
Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 2,6
1,717
68,83
2,494
Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 3,0
1,842
48,00
3,837
Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 4,0
1,306
137,33
0,951
Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 5,0
0,331
299,83
0,110
Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 6,0
0,090
340,00
0,026
Citrato-Fosfato 0,1 Mol/L pH 7,0
0,105
337,50
0,031
Borato 0,1 Mol/L pH 8,0
0,247
313,83
0,078
Borato 0,1 Mol/L pH 9,0
0,358
300,33
0,119
Borato-NaOH 0,1 Mol/L pH 10,0
0,843
214,50
0,393
Borato-NaOH 0,1 Mol/L pH 11,0
0,631
249,83
0,252
Tubo controle
2,130
0
0
A seguir, está o gráfico de atividade relativa x pH:
[pic 1]
V. Discussão:
O pH ótimo de atividade da α-amilase bacteriana oscila entre 4,0 e 7,0(INSUMOS, 1998).O pH encontrado no experimento não se encontra na faixa do pH esperado, pois esse valor foi pH=3,0. No gráfico, trata-se do ponto experimental, cuja atividade relativa é máxima.
Esse ponto foi determinado ao medir as absorbâncias dos tubos, calculando as unidades de α-amilase de cada um e suas atividades relativas. O pH=3, apresentou a maior atividade relativa, sendo este o pH ótimo de reação da α-amilas. Os tubos ficaram com diferentes
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