Relatório ecotoxicologia

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Materiais e Métodos

1)Ingrediente ativo (Dimetoato), alimento (água e açúcar), Micropipeta, Ponteiras, Microtubos (eppendorf), potes de plástico, vórtex.

2) Ingrediente ativo (Dimetoato), alimento (água e açúcar), Micropipeta, Ponteiras, Microtubos (eppendorf), potes de plástico, vórtex.

3)Microcomputador, software BioStav v5.

1)MétodosHouve a coleta anterior dos indivíduos adultos de abelhas operárias da espécie Melipona scutellaris. Neste teste foram utilizadas 210 abelhas, com repetições de 70 abelhas de três diferentes colônias.

Realizaram-se diversas diluições para encontrar a concentração desejada do ingrediente ativo, iniciada pela solução inicial ou solução mãe. Esta solução é composta pelo ingrediente ativo dissolvido em água ou outro solvente. As demais concentrações são obtidas por meio da cascata de diluição.

Para determinar as quantidades de Dimetoato, foi utilizada seguinte expressão:

C1 x V1 = C2 x V2

Na qual C1 expressa a solução que conhecida (começando com a solução “mãe”), V1 igual ao volume que se utilizou para determinada concentração, C2 igual à próxima concentração e V2 igual a um volume constante (no caso 20.000 µl).

Para cada concentração, o volume total é constante igual a 20.000, assim:

- Concentração de 14 µl de Dimetoato, aplicando-se na expressão, temos:

16 x V1 = 14 x 20000

V1 = 17.500 µl , que foi acrescido de 2.500 µl de xarope, totalizando em 20.000 µl o volume final, nessa concentração.

- Concentração de 12 µl de Dimetoato, aplicando-se na expressão, temos:

14 x V1 = 12 x 20000.

V1 = 17.500 µl , que foi acrescido de 2.500 µl de xarope, totalizando em 20.000 µl o volume final, nessa concentração.

- Concentração de 10 µl de Dimetoato, aplicando-se na expressão, temos:

12 x V1 = 10 x 20000.

V1 = 16666,66 µl , que foi acrescido de 3333,3 µl de xarope, totalizando em 20.000 µl o volume final, nessa concentração.

- Concentração de 08 µl de Dimetoato, aplicando-se na expressão, temos:

10 x V1 = 08 x 20000

V1 = 16.000µl , que foi acrescido de 4.000 µl de xarope, totalizando em 20.000 µl o volume final, nessa concentração.

- Concentração de 06 µl de Dimetoato, aplicando-se na expressão, temos:

08 x V1 = 06 x 20000

V1 =15000 µl , que foi acrescido de 5.000 µl de xarope, totalizando em 20.000 µl o volume final, nessa concentração.

Após a diluição, as abelhas receberam uma dose do alimento contaminado com a substância teste. Da concentração de 14 µl foram disponibilizados 600 µg do alimento em microtubos previamente furados e oferecidos às mesmas para que estas se alimentassem a vontade. Para cada concentração foi disponibilidade certa quantidade de alimento. Depois disso, foram levadas à BOD a 28° por 24horas.

Métodos

2)Para a determinação da DL de Dimetoato, foi também realizada a coleta de indivíduos adultos de abelhas operárias da espécie Melipona scutellaris. Neste teste também foram utilizadas 210 abelhas, com repetições de 70 abelhas de três diferentes colônias.

Realizaram-se também diversas diluições para encontrar a concentração desejada do ingrediente ativo, iniciada pela solução inicial ou solução mãe e depois a cascata de diluição.A quantidade de Dimetoato para o segundo teste foi determinada por meio da expressão citada anteriormente. Todavia, as concentrações foram alteradas. Assim, tivemos:

-- Concentração de 100ng/ µl de Dimetoato, aplicando-se na expressão, temos:

1000 x V1 = 100 x 3000

V1 = 300 µl, que foi acrescido de 2700µl de água, totalizando em 3000µl o volume final, nessa concentração.

-- Concentração de 1,6ng/ µl de Dimetoato, aplicando-se na expressão, temos:

100 x V1 = 1,6 x 3000

V1 = 48 µl, que foi acrescido de 2952µl de água, totalizando em 3000µl o volume final, nessa concentração.

-- Concentração de 1,3ng/ µl de Dimetoato, aplicando-se na expressão, temos:

1,6x V1 = 1,3 x 3000

V1 = 2438 µl, que foi acrescido de 562µl de água, totalizando em 3000µl o volume final, nessa concentração.

-- Concentração de 1,0ng/ µl de Dimetoato, aplicando-se na expressão, temos:

1,3 x V1 = 1,0 x 3000

V1 = 2308 µl, que foi acrescido de 692µl de água, totalizando em 3000µl o volume final, nessa concentração.

-- Concentração de 0,07ng/ µl de Dimetoato, aplicando-se na expressão, temos:

1,0 x V1 = 0,07 x 3000

V1 = 210 µl, que foi acrescido de 2790µl de água, totalizando em 3000µl o volume final, nessa concentração.

-- Concentração de 0,04ng/ µl de Dimetoato, aplicando-se na expressão, temos:

0,07 x V1 = 0,04 x 3000

V1 = 1714,3µl, que foi acrescido de 1285,7µl de água, totalizando em 3000µl o volume final, nessa concentração.

Após a diluição, as abelhas foram levadas ao refrigerador para adormecerem. Depois de alguns segundos, pode-se manipula-las fora dos potes em que se encontravam. Elas receberam, uma a uma, doses da solução teste no tórax e foram levadas à BOD a 28°.[pic 3] Figura 1 – abelhas adormecidas antes de recebem a solução de Dimetoato e água.

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