Bioquimica

...

b) Em ( A ) - 1,0 ml da solução de Alanina ou Glicina;

Em ( Pro ) - 1,0 ml da solução de Prolina;

Em ( PTN ) - 1,0 ml da solução de Proteína;

Em ( Branco ) - 1,0 ml da Salina Fisiológica (NaCl - 0,9%)

c) Colocar os tubos em banho fervente durante 5 minutos ou até atingir a coloração esperada.

d) Comparar os tubos e anote os resultados

2. REAÇÃO DE BIURETO (CuSO4 a 5% alcalino)

Em 4 tubos de ensaio marcados ( A1 ), ( Pro1 ), ( PTN1 ) e ( B1 ), adicionar:

a) Nos quatro tubos - 1,0 ml do reagente de biureto

b) Em ( A1 ) - 1,0 ml da solução de Alanina;

Em ( Pro1 ) - 1,0 ml da solução de Prolina;

Em ( PTN1 ) - 1,0 ml da solução de Proteínas

Em ( B1 ) - 1,0 ml de Salina Fisiológica

c) Agitar e comparar os tubos.

d) Anotar os resultados.

AULA PRÁTICA 4 – PROPRIEDADES PROTÉICAS

OBJETIVOS:

O aluno deverá ser capaz de:

- Conhecer o comportamento molecular das proteínas frente à variações de temperatura (desnaturação térmica), pH (desnaturação por adição de ácidos) e de concentração de sal (efeitos ?salting in? e ?salting out? ? precipitação protéica);

- Observar os principais fatores interferentes em uma reação enzimática, como variação na concentração do substrato, de temperatura e de pH.

MATERIAIS:

Equipamentos e vidrarias básicos de um laboratório de Bioquímica (pipetas, pêras, micropipetas, ponteiras, tubos de ensaio, estantes, bico de bunsen, cuba de banho-maria, reagentes, pega-tubos, etc).

Soluções da prática de propriedades protéicas: solução de proteína (clara de ovo diluída), de salina fisiológica (NaCl 0,9%), de biureto, de ácido tricloacético 10%, de sulfato de amônio saturado.

- DESNATURAÇÃO TÉRMICA

Em tubo de ensaio, colocar 2,0 ml da solução de proteínas. Aquecer até fervura (ou no máximo até 8 minutos). Observar se ocorreu alguma modificação. Centrifugar por 3min. Separar o sobrenadante (se houver), retirando-o com pipeta pasteur e transferindo a um novo tubo limpo. Adicionar salina (2,0 ml) ao precipitado (se houver) e agitar. Adicionar 1,0mL de biureto no sobrenadante e agite. Anote o que observou.

- DESNATURAÇÃO ÁCIDA

Em tubo de centrífuga, coloque 2,0 ml da solução de proteínas. Adicione 1,0 ml de ácido tricloroacético (TCA) a 10% (CUIDADO! Este ácido é apresenta poder corrosivo). Agite e observe o que ocorre. Centrifugue por 3 min, separe o sobrenadante em novo tubo. Adicione 1mL de biureto no sobrenadante. Ao precipitado, adicione salina (2,0 ml) e anote suas observações.

- PRECIPITAÇÃO PELO SULFATO DE AMÔNEO SATURADO (SALTING OUT)

Em tubo de centrífuga, 2,0 ml de solução de proteínas e adicionar 2,0 ml da solução saturada de sulfato de amônio (SAS). Separe o sobrenadante cuidadosamente. Ao precipitado, adicionar 4,0 ml de água destilidada e agitar. Anote as observações. Caso não ocorra solubilização, lave novamente com salina, descarte o sobrenadante e adicione novamente 4,0 ml de salina ao precipitado. Ao sobrenadante, adicione 1mL de biureto. Anote suas observações.

COMPARAR OS RESULTADOS ENTRE OS TRÊS PROCESSOS.

AULA PRÁTICA 5 – IDENTIFICAÇÃO DE CARBOIDRATOS

Para a prática relacionada à análise da presença e diferenciação dos carboidratos, evidenciar a ação do benedict na identificção dos monossacarídeos, do lugol dos polissacarídeos (amido) e do seliwanoff na separação de cetoses (frutose) de aldoses (aldose); Sugere-se a utilização de sucos de frutas e soluções de carboidratos.

OBJETIVOS:

O aluno deverá ser capaz de:

- Conhecer as formas de identificação e separação laboratorial de carboidratos.

- Conhecer os métodos e fundamentos das análises de carboidratos em laboratório.

MATERIAIS:

Laboratório de Bioquímica, contendo quadro branco, cuba de banho-maria e capela de fluxo, principalmente, além das vidrarias básicas (tubos de ensaio, estantes, beckers, erlenmeyers, pipetas, peras, pegadores de tubo, etc.) e reagentes (reativos de benedict, seliwanoff, lugol; soluções de glicose, frutose, amido, sucos diversos).

A) Identificação de Carboidratos

1. Teste de Benedict:

Em tubo de ensaio limpo, seco e etiquetado com o nome do carboidrato, pipetar 1ml da solução de cada carboidrato: 1) água (controle), 2) amido, 3) glicose, 4) frutose, 5) suco de laranja e 6) suco de banana. Adicinar:

· 1 ml reativo de Benedict;

· Aquecer em 65 graus durante 1 minuto ou até atingir a coloração desejada;

· Deixar esfriar espontaneamente;

· Observar/anotar os resultados.

2. Teste de Seliwanoff:

a) Rotular 6 tubos de ensaio com as respectivas amostras: 1) água (controle), 2) amido, 3) glicose, 4) frutose, 5) suco de laranja e 6) suco de banana.

b) Pipetar 1,0 ml de cada uma das amostras no tubo correspondente

c) Pipetar 2 ml de reativo de Seliwanoff em todos os tubos

d) Ferver, em banho ? maria, estes tubos de ensaio por cerca de 10 minutos. Observe, minuto a minuto, durante este procedimento, a ocorrência de possíveis alterações e tire suas conclusões.

3. Teste do Iodo (Lugol)

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