A Biologia Molecular e Biotecnologia

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Reação em cadeia da polimerase

- Qual o princípio da reação em cadeia da polimerase?

Permite que uma seqüência de DNA ou RNA seja amplificado in vitro, produzindo bilhões de copias das seqüências desejadas em poucas horas.

- Quais os componentes necessários para uma reação de PCR?

DNA polimerase, desoxirribonucleotídeos trifosfatados ( A,T,G e C); par de primers, alguns sais; DNA molde.

- As reações de PCR ocorrem em ciclos repetidos de desnaturação, anelamento e extensão.

- Explique o que ocorre em cada etapa.

Desnaturação – para ocorrer a amplificação do DNA, ele deve ser desnaturado. A abertura da fita ocorre em torno de 50 a 100ºc em que as pontes de hidrogênio são rompidas.

Anelamento dos primers: Em seguida a temperatura é reduzida para 45 a 65ºc para ocorrer o anelamento dos primers.

Extensão: Após o anelamento dos primers, a reação é aquecido em torno de 70ºc para a extensão do DNA polimerase.

- Por que devem ser realizados diversos ciclos repetidos?

São realizados de 30 a 40ciclos repetidos de desnaturação do DNA molde, anelamento dos primers e extensão pelo DNA polimerase

- Sobre as variações da técnica de PCR, preencha as lacunas com:

- RT-PCR

- PCR em tempo real

- PCR multiplex

- ( III ) Utiliza diferentes pares de primers para uma mesma reação de PCR, produzindo amplicons com tamanhos variáveis

- ( I) Método utilizado para análise da expressão gênica a partir da quantificação de RNAm

- ( II ) Neste método são utilizados corantes fluorescentes que se ligam ao DNA molde ou ao amplicon a medida em que ocorre a síntese de novas fitas

- ( III ) Este método permite economia de tempo e de reagentes, pois amplifica-se diferentes seqüências de DNA ao mesmo tempo

- ( I ) A informação do RNAm deve ser convertida para uma fita de cDNA

Biologia molecular forense

- Sobre os polimorfismos genéticos, preencha as lacunas:

- Polimorfismos de comprimento de fragmentos de restrição (RFLP)

- Polimorfismo de nucleotídeo único (SNP)

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- Polimorfismos de minissatélites (VNTR)

- Polimorfismos de microssatélites (STR)

- Polimorfismo de comprimento de fragmentos amplificados (AFLP)

- ( II ) É uma pequena variação genética em um único nucleotídeo

- ( V ) Resultado da associação do RFLP e PCR com modificações

- ( I ) Enzimas de restrição geram fragmentos de diferentes tamanhos que são separados por eletroforese em gel. Os fragmentos de interesse são identificados por Southern blot com uso de sondas específicas

- ( ) Consistem em seqüências nucleotídicas repetidas que variam no número de ocorrências do motivo básico (ex: GAC)

- ( ) Marcador encontrado em maior abundância quando comparado com os demais, por isso permitem identificar mais polimorfismos entre indivíduos

- ( IV) Consistem em repetições de seqüências de dois a seis nucleotídeos, ocupando uma extensão de até 100 pares de bases

- Quais tipos de marcadores podem ser utilizados no teste de paternidade?

Avaliação de VNTR, avaliação de microsatélites, DNA mitocondrial, analises de cromossomo Y (PAI)

- Foi realizada a análise de polimorfismos genéticos do bebê abaixo e 5 possíveis casais que poderiam ser os pais do mesmo. Analisando o gel abaixo, qual casal seria os pais do bebê?

R: O casal C são os pais do bebê.[pic 2]