A Biotecnologia farmacêutica

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O tratamento com GH de adultos deficientes em GH foi aprovado pela FDA em 1996. Posteriormente, muita experiência clínica foi avaliada quanto ao tratamento de adultos com GHD.

Slide 12 Fisiologia (montar slide com essas informações)

O hormônio do crescimento (GH) tem efeitos importantes na estimulação do metabolismo dos ossos, cartilagens e músculos, e crescimento somático durante a infância. (Descrição)

-Estimula a maioria das células a produzir fatores de crescimento:

- Fígado, músculos esqueléticos, ossos e cartilagens

-Também estimula (aumenta):

- Captação de AA

- Síntese Proteica (Rna)

-Reduz a destruição de proteínas

-Ação anti-insulina:

- Por ação direta produz lipólise

- Inibe a entrada de glicose na célula

Slide 13 Importancia Clínica (inserir algumas imagens de nanismo) -Deficiência:

- Nanismo, hipotireodismo, função sexual

Slide 14 Método de obtenção do rhGH (inserir as informações abaixo em tópicos) Transformação (Nível laboratorial)

.Inoculação de 5mcl do gene rhGH nas bactérias E.coli em tubos de ensaio

.Mistura-se suavemente

.Incubação por 20min

.Choques de calor por 90s à 42c (sem agitação)

.Transferência dos tubos para o gelo

.Adição de 250mcl de substrato (temperatura ambiente)

.Captação dos tubos e agitação horizontal a 37C por 45min

Slide 15 .Centrifugaçao à 4000rpm

.Descartar sobrenadante

.Adição de 100mc de substrato (meio SOB) à temperatura ambiente

.Ressuspensao das células

.1 - Distribuição de 10mcl de cada transformação obtida em uma placa LBA ( Luria - Bertani Ágar) para obsvervaçao

.2 - adição de sulfato de amônio para fracionar o produto resultante do choque osmótico (rhGH)

.Para verificação de pureza, é separada amostra para análise por cromatografia DEAE - Sepharose fast flow, Cromatografia de exclusão molecular e HPLC. Sendo que logo após é realizada a determinação das proteínas derivadas da E.Coli e presença de contaminantes no produto final e nos residuos efluentes.

Slide 16 Vitamina B12 (imagem da estrutura química da vitamina b12 ou alguma outra arte pra ilustrar) A vitamina B12 é o nome utilizado para todos os corrinoides que exibem a atividade biológica qualitativa da cianocobalamina. Certas bactérias da microflora em animais ruminantes sintetizam a vitamina e o fígado de tais animais é, portanto, uma fonte rica de vitamina (Baku e Dickerson, 1996). Em animais carnívoros e humanos, a síntese intestinal não é suficiente e, portanto, deve obtê-lo de seus alimentos, na maioria das vezes da carne de outros animais. (descrição e breve historico sem texto)

Slide 17 Fisiologia (imagem da estrutura da vit b12 ao lado de imagem de hemacias) Os seres humanos só exigem vitamina B12 para maturação das Hemácias.Cobalamina tem a estrutura mais complexa de todas as vitaminas sintetizadas por bactérias, sendo necessárias cerca de trinta genes para sua biossíntese. (imagem da estrutura da vit b12 ao lado de imagem de hemacias)

A produção industrial de vitamina B12 é realizada exclusivamente por processos de fermentação, uma vez que a síntese química da cobalamina é muito dispendiosa (consome muita energia). Slide 18 Importancia clinica A deficiência de vitamina B12 tem sido ligada a deterioração da funcao mental, problemas mentais e inúmeros distúrbios psicológicos. Além disso, está relacionado à ocorrência de anemias, irritabilidade, distúrbios gástricos e depressão nervosa Slide 19 Obtenção de vit b12 apartir da bacteria propionibacterium freudenreichii

(montar esquema em tópicos em quadrados ou balões)

- Relatou-se produzir com maior rendimento de vit. b12 de 20 mg por litro - Meios de produção: glicose, milho íngreme, betaína e cobalto .pH 7,5 .temperatura: 30c

Slide 20 Fermentação (montar esqueminha com quadrados se ligando)

.2 ciclos: anaeróbico: 70 hrs; aeróbico: 50 horas - Ciclo anaeróbico: formação de cobinamida (O2 inibe o processo) - Necessário adicionar 0,1% de 5,6-dimetil benzimidazol (não pode sintetizar prontamente) -Ciclo aeróbico: Ocorre a formação de nucleotídeos que se ligam à cobinamida previamente formada para formar Cobalamina. -Cultura contínua - 2 tanques em série, período de retenção 60 horas, obtém-se 15 mcl/ml

Slide 21 Passo 1 : Formulação do meio de cultura

Passo 2 : esterilização do meio de cultura

Passo 3 : Fazer a cultura inicial

Passo 4 : Fermentação Anaeróbica

Passo 5 : Fermentação Aeróbica

Passo 5 : Recuperação da substancia

Referencias

Rezaei M, Zarkesh-Esfahani SH. Optimization of production of recombinant human growth hormone in Escherichia coli. J Res Med Sci. 2012;17

HSIUNG H.M., MAYNE N.G. and BECKER G.W. High level expression, efficient secretion and folding of human growth hormone in Escherichia coli. Biotechnology, v. 4, p. 991-995, 1986.

Consensus guidelines for the diagnosis and treatment of growth hormone (GH) deficiency in childhood and adolescence: summary statement of the GH Research Society. GH Research Society. J Clin Endocrinol Metab. 2000;85(11):3990–3993.

Mark E. Molitch David R. Clemmons Saul Malozowski George R. MerriamStephen