Determinação de creatinina plasmática e urinária

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vez relaciona-se intimamente com os mecanismos moleculares. Por sua vez, muitos desses mecanismos foram descritos graças a pesquisas que fizeram o uso de metodologias laboratoriais.

Estas idéias valem tanto para o normal como para o anormal, ou seja, as patologias, que a muito foram descritas macro e microscopicamente têm sempre, como causas, alterações do funcionamento celular e seu mecanismo metabólico. Então, por meio do uso de técnicas físico-químicas, as análises clínicas foram 2 beneficiadas enormemente com os métodos quantitativos de análises que utilizam, por exemplo, a espectrofotometria (CISTERNAS, et al. 2005).

Segundo Motta (2009, p.15), a fotometria e a espectrofotometria estudam a medição das grandezas relativas à emissão, à recepção e à absorção da luz. Em bioquímica clínica, tais medições são essenciais para a compreensão de disfunções metabólicas desencadeadas por alguma patologia. Ainda de acordo o autor, as medições são analisadas quantitativamente baseadas na absorção de luz por soluções, como por exemplo, urina, plasma ou soro.

Os fotocolorímetros e espectrofotômetros são os instrumentos que efetuam as medições. Aliadas a esses instrumentos, estão às reações de identificação e caracterização de biomoléculas como carboidratos, proteínas, lipídios, colesterol entre outras, que no passado foram elucidadas e desenvolvidas por químicos e bioquímicos (HIRANTO et al., 2001, p.25).

O princípio da espectrofotometria baseia-se na absorção da luz por moléculas dispersas em uma solução. As radiações eletromagnéticas, que compõem a luz, com comprimento (λ). de onda entre 380 e 750 nm são visíveis ao olho humano, constituindo numa pequena parcela do espectro eletromagnético. A zona do 3 espectro cujas radiações possuem um comprimento de onda abaixo de 380 nm é denominada ultravioleta (UV), já aquelas que possuem comprimento de onda acima de 750 nm correspondem à zona infravermelha (MOTTA, 2009, p.16)

A luz branca, quando passa por um prisma, é decomposta em raios de luz com distintos comprimentos de onda, que são projetados em faixas que vão do vermelho ao violeta, sendo então chamado de espectro de emissão. Assim, cada espectro luminoso possui um intervalo de comprimento de onda em nanômetros.

Segundo princípios da Física, um objeto ou substância absorve toda a luz incidente exceto a do intervalo de comprimento de onda observado pela visão. Assim, uma solução de cor azul apresenta esta cor pelo fato de ter absorvido as demais cores que constituem o espectro luminoso terem sido absorvidas. Assim, a cor de uma solução é complementar à luz absorvida (MOTTA, 2009, p.16).

Dependendo a natureza da solução que será examinada, obtêm-se os espectros de absorção da luz, de modo que a imagem espectral pode servir para a identificação e quantificação de uma determinada substância.

2.0 Objetivos

Calcular a concentração de creatinina do plasma e da urina.

3.0 Materiais e Métodos

Espectrofotômetro UV-Vis

Cubetas de quartzo

Microtubos de plástico (2 mL)

Tubos de ensaio

Micropipetas

Ácido pícrico

Hidróxido de sódio

Cronometro

Plasma sanguíneo

Inicialmente foi retirado o sangue de uma aluna voluntária, a coleta do sangue foi realizada pelo professor Tiago;

No laboratório foram preparadas diversas amostras para análise no espectrofotômetro, cada grupo ficou responsável por uma diferente amostra que serão apresentadas na tabela seguinte:

Tipos de Amostras

Padrão

Teste (Plasma)

Amostra desconhecida 1

Amostra desconhecida 3

Reagente de trabalho

1,0 mL

1,0 mL

1,0 mL

1,0 mL

Padrão

0,1 mL

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Plasma Coletado

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0,1 mL

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A1

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0,1 mL

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A3

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0,1 mL

Tabela 1: Tipos de amostras preparadas no experimento

Todos os grupos realizaram um teste com a amostra do tipo “Plasma”, feita com o plasma do sangue colhido da aluna voluntária, o “Grupo 1” e o “Grupo 3” três realizaram testes com amostras do tipo “Padrão”, o “Grupo 2” com a amostra desconhecida 1 (que será chamada de “A1”), por fim o grupo quatro com a amostra 3(que será chamada de “A3”). O chamado “Reagente de trabalho” é uma solução hidróxido de sódio com ácido pícrico.

OBS. O reagente de trabalho foi apenas inserido na amostra dentro da cubeta, no momento em que foi feita a varredura de absorbância;

Com as amostras preparadas, as mesmas foram submetidas à varredura de absorbância no espectrofotômetro, ajustado com o comprimento de onda de 510 nm e iniciar o procedimento;

Foram anotadas a absorbância (Ao) com 30 segundos, e a absorbância (Af) após mais 90 segundos.

4.0 Resultados e Discussão

Os valores de absorbância obtidos de cada grupo foram:

Tipo de Amostra

Tempo