Nosso trabalho é sobre DNA recombinante.

...

Então o plasmídeo é nossa segunda ferramenta da tecnologia do DNA recombinante, vai servir para introduzir na bactéria um gene que originalmente que não era dela, mais que poderá ser utilizado por ela para fabricar substância do nosso interesse.

SLIDE 12

A nossa terceira ferramenta é um tipo de vírus, aquele mesmo vírus parasita da bactéria o bacteriófago, esse vírus, ele é capaz de se acoplar a bactéria. Injetar o seu DNA na bactéria e esse DNA passa a comandar as funções da bactéria reproduzindo o vírus dentro dela.

SLIDE 13

Reparem na imagem como é o bacteriófago, ele tem uma capsula com uma longa cauda e dentro dessa capsula é onde se encontra o DNA, através dessa longa cauda ele se acopla a bactéria e injeta o DNA que ele contém para que esse DNA então comande as ações da bactéria.

SLIDE 14

E a tecnologia do DNA recombinante o que faz com esse bacteriófago?

Na realidade extrai o seu DNA, tira a parte mais central desse DNA, e substitui por aquele pedaço de DNA do nosso interesse, mais uma vez poderia ser um gene do qual queremos a proteína que ele vai ser capaz de traduzir, então esse pedaço de DNA inserido no DNA do bacteriófago é devolvido a esse bacteriófago e em contato com a bactéria ele vai injetar esse DNA na bactéria e esse DNA ligado depois ao DNA da bactéria, vai permitir que ela fabrique aquela mesma substância do nosso interesse relacionada a esse gene quando ele for traduzido.

SLIDE 15

Então vamos agora passo a passo verificar como se pode reproduzir um microrganismo recombinante, um microrganismo que contenha em seu interior, aquele gene do nosso interesse e que seja capaz depois de traduzir esse gene na substancia que nós queremos obter.

SLIDE 16

Primeiro passo seria a obtenção do DNA a ser clonado, isso pode ser feito identificando no DNA o gene de nosso interesse e cortando com as enzimas de restrição.

O segundo passo seria a preparação do nosso vetor, se o vetor é o plasmídeo, eu então retiro o plasmídeo dessa bactéria, corto o plasmídeo com a mesma enzima de restrição e encaixo esse gene do meu interesse no plasmídeo.

O terceiro passo seria a ligação desse vetor com o inserto, usa-se uma enzima de DNA ligase que vai funcionar como cola grudando esse gene no restante do plasmídeo, com isso eu tenho um DNA recombinante, que contém o DNA do plasmídeo bacteriano e mais aquele gene do meu interesse.

Agora eu reintroduzo esse plasmídeo a uma bactéria, é a transformação dessa bactéria, essa bactéria colocada em meio de cultura adequada, vai começar a traduzir esse gene insertado naquela proteína, naquela substância, pode ser um hormônio, uma enzima do meu interesse, mais ela vai ter que concorrer com outras bactérias que talvez não tenham esse plasmídeo e que seriam mais velozes na produção de outras substâncias, pra que isso então não aconteça, eu preciso fazer uma seleção, e manter apenas essa bactérias recombinantes na minha placa de cultura, como eu faço isso? Adicionando um antibiótico, sabendo se que o plasmídeo contém um gene pelo menos de resistência antibiótica, qualquer bactéria que não tenha esse plasmídeo, com o contato com o antibiótico, vai ser completamente eliminada da minha placa de cultura, e assim eu só vou ter as bactérias que irão produzir a substancia do meu interesse.

SLIDE 17

Veja então na figura o passo a passo da construção do DNA recombinante.

Primeiro a molécula de um plasmídeo circular é cortada, utilizando se enzima de restrição, depois é encaixado nesse plasmídeo aberto um pedaço de DNA do nosso interesse, e ele é colocado a molécula de DNA plasmidial com a DNA ligase, após isso ele é inserido na célula hospedeira, que irá então produzir a nova proteína.

SLIDE 18

Veja na próxima figura, um exemplo, o da produção da insulina recombinante lá em 1978, o DNA de insulina foi insertado no plasmídeo extraído de uma bactéria e depois de devolvido permitiu a essa bactéria produzir então, a insulina humana, essa produção da insulina humana foi uma grande vitória dos diabéticos, pois permitiu que eles deixassem de usar insulina bovina ou suína que trazia uma série de efeitos colaterais ao longo prazo.

ANDRÉ CANUTO ---------------------------------------------------------------------------------------------

SLIDE 19 - A TECNOLOGIA DO DNA RECOMBINANTE E SEU VASTO CAMPO DE APLICAÇÃO

Nas últimas décadas, a Tecnologia do DNA Recombinante tem sido aplicada em diversas áreas, em todas elas somando grandes benefícios. Segundo Pierce (2004), além de dar valiosas informações sobre os genes, sua estrutura, natureza e função, tem sido utilizada para produção de substâncias úteis (farmacêuticas ou não), cultivo de bactérias especializadas e melhoramento genético artificial de plantas e animais importantes sob ponto de vista econômico.

SLIDE 20 - FARMACOLOGIA

A Tecnologia do DNA Recombinante tem grande aplicação na fabricação de produtos farmacêuticos. Desde sua descoberta, já foram desenvolvidas diversas alternativas melhores e mais eficazes para o tratamento de doenças e distúrbios humanos. Uma delas é a produção de insulina humana em escala comercial a partir de bactérias transformadas por plasmídeos portadores do gene humano codificador da referida proteína.

SLIDE 21 - BACTERIAS ESPECIALIZADAS

Conforme Burns & Bottino (1991), uma das primeiras das técnicas do DNA Recombinante foi provavelmente a combinação de vários genes para metabolizar petróleo em um único plasmídeo e introduzi-lo em bactéria marinha, tornando este organismo capaz de limpar mancha de petróleo nos oceanos. Além disso, muitas bactérias podem ser modificadas por meio da engenharia genética de maneira que funcionem mais eficientemente em diversos processos industriais nos desempenham papel importante tais como a produção de etanol a partir de material vegetal, lixívia de minérios, tratamento de esgotos e detritos, dentre outros (PIERCE, 1994).

SLIDE 22 - SETOR PRODUTIVO AGROPECUÁRIO

A engenharia genética tem sido utilizada no desenvolvimento