A Inibição e redução de Sphk1 diminuíram a neuro inflamação MCAO

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MCAO intensificou a atividade de Esfingosina quinase no cóterx ipsilateral, que foi atenuada por desmontagem ou inibição de Esfingosina quinase 1

Para investigar se a expressão induzida por MCAO de Sphk1 resultou em atividade de Sphk aumentada e se Sphk1 e 5C atenuaram a indução pós-isquêmica da atividade de Sphk no cérebro isquêmico, medimos a atividade de Sphk às 6 h após a reperfusão a seguir ao MCAO. Escolhemos este ponto de tempo inicial com base na nossa observação de que a expressão de Sphk1 foi induzida tão cedo quanto 6 h após a reperfusão (Fig. 1). Além disso, se a atividade de Sphk1 contribuiu para a evolução do infarto e a neuroinflamação aumentada às 24 h após a reperfusão, pensamos que o aumento da atividade deve ocorrer antes do tempo de 24 h. Consistente com os resultados relativamente à expressão de Sphk1, observou-se que a atividade de Sphk foi significativamente aumentada na penumbra cortical em comparação com o córtex contralateral e os córtices dos ratinhos operados simuladamente (Fig. 5). Além disso, em comparação com o siRNA de NS e o veículo, o siRNA de Sphk1 injectado 2 dias antes da MCAO e a administração de 5C 3 h após reperfusão atenuou significativamente a atividade de Sphk induzida por isquemia na penumbra cortical 6 h após reperfusão.

A inibição de Sphk1 suprimiu a neuroinflamação mediada por microglia na condição de isquemia in vitro

Os neurônios tratados com OGD mostraram-se como tendo uma microglia primária para o fenótipo pró-inflamatório com uma abordagem de transferência de meio condicionado (Hu et al., 2012). Para investigar ainda mais se a indução pós-isquêmica de Sphk1 atuava através de um mecanismo microglial para modular a neuroinflamação sob a condição isquêmica, utilizamos esta abordagem de transferência de meio condicionado in vitro. As microglias primárias foram tratadas com meios condicionados (CM) recolhidos a partir de neurônios de controle sem tratamento com OGD ou a partir de culturas neuronais pós-OGD. Em comparação com a microglia que foram mantidas em meio microglial regular e as microglias que foram tratadas com CM recolhido a partir de neurónios de controlo, o mRNA de Sphk1 foi induzido na microglia primária que foi tratada com CM recolhido a pa rtir dos neurônios pós-OGD 6 h após tratamento com CM (Figura 6A). Além disso, em comparação com o meio microglial regular eo CM coletado a partir dos neurônios de controle, o CM dos neurônios pós-OGD induziu notavelmente as expressões de mRNA dos mediadores pró-inflamatórios (IL-1β, iNOS, IL-6 e TNF-α). Esta indução foi atenuada dependente da dose pelo inibidor Sphk1 5C. A doses acima da IC50 (IC50 = 3,3 μM), o 5C inibiu fortemente a expressão do mRNA dos mediadores pró-inflamatórios induzidos pelo meio neuronal condicionado por OGD, enquanto que a 1 μM (bIC50), o 5C inibiu apenas parcialmente a indução do pró-mediadores inflamatórios. 5C por si só não teve efeito sobre a viabilidade celular nas concentrações testadas (dados não apresentados). Coletivamente, estes resultados sugerem que a inibição de Sphk1 suprimiu a neuroinflamação mediada por microglia sob a condição isquêmica in vitro.