Cinética Enzimática
Por: kamys17 • 21/4/2018 • 1.002 Palavras (5 Páginas) • 334 Visualizações
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9°) Foi resfriado os tubos e adicionou-se 8 mL de água destilada, com auxílio de uma proveta de 10 mL; e
10°) Foi colocada uma amostra de cada tubo no espectrofotômetro para leitura de absorvância.
1.Em uma estante, preparar 7 tubos de ensaio com as quantidades de tampão e enzima indicadas na Tabela 2 (realizar o ensaio em duplicata). 2.Equilibrar a temperatura dos tubos a 30oC por 5 minutos. 3.Adicionar substrato. 4.Incubar a 30 o C por exatamente 10 minutos. 5.Proceder ao método de dosagem de açúcares redutores 6.Anotar a absorvância a 540 nm na tabela 2. Não despreze o conteúdo dos tubos ainda. Eles ainda serão usados. Tabela 2 Tubo Tampão (mL) Enzima (mL) Sacarose (mL) Absorvância (média das duplicatas) II-1 0,8 0,2 0,0 II-2 0,7 0,2 0,1 II-3 0,6 0,2 0,2 II-4 0,5 0,2 0,3 II-5 0,4 0,2 0,4 II-6 0,3 0,2 0,5 II-7 0,2 0,2 0,6 Obs: 1.Acertar a absorvância zero para o tubo II-1 (branco) em comprimento de onda de 540 nm. 2.Ler a absorvância dos tubos II-2 a II-7 e anotar os resultados na Tabela 7 . Relatório: 1. Descrever, sucintamente, o objetivo da prática (não repita o experimental utilizado). 2. Resultados a serem apresentados no relatório - Apresentar todas as tabelas completas com os resultados experimentais e cálculos - Apresentar o gráfico da curva padrão obtida (absorvância x [sacarose hidrolisada]) - Apresentar os gráficos da velocidade de reação em função do volume adicionado de enzima e de concentração de substrato (Gráfico V X [S] e de 1/V x 1/[S] e cálculo de KM e Vmax em cada gráfico). 3. Questões a serem respondidas no relatório a.Que tipo de curva foi obtida quando se relacionou velocidade com a quantidade de enzima? Explique conceitualmente por que a elevação da concentração da enzima gera um aumento da velocidade inicial da reação. b.Com base nos resultados do experimento II, explique por que não ocorre um aumento significativo da velocidade inicial da reação, após determinada concentração de substrato. c.Existem diferenças entre os resultados de Vmáx e Km obtidos pelo gráfico de Michaelis-Menten e do duplo recíproco (Lineweaver-Burk)? Qual dos gráficos apresenta os resultados mais exatos? Por quê?
- Resultados e Discussão:
EXPERIMENTO 3: Determinação da curva padrão
1°) Cálculo de massa de glicose a ser pesada:
1,8 mg
Mglicose = _______ x 50 mL = 0,09 g
1,0 mL
2°) A solução tampão foi utilizada para estabilizar o pH;
3°) Tabela 3:
Tubo
Tampão (mL)
Solução Padrão (mL)
Sacarose hidrolisada (mmols/mL)
Absorvância (540 nm)
1
1
0
0,0
0,000
2
0,9
0,1
0,5
0,032
3
0,8
0,2
1,0
0,064
4
0,7
0,3
1,5
0,079
5
0,6
0,4
2,0
0,088
6
0,5
0,5
2,5
0,158
7
0,4
0,6
3,0
0,165
8
0,3
0,7
3,5
0,175
9
0,2
0,8
4,0
0,181
10
0,1
0,9
4,5
0,187
3°) Gráfico I:
Conversão de mmol/mL para mol/mL:
- mmol/mL = 10-3mol/mL
[pic 1](Gráfico I)
O gráfico I representa a curva padrão que permite determinar a concentração de glicose formada na hidrólise da sacarose pela invertase. Desta forma será possível determinar a taxa de formação de produtos por mL de reação em um determinado intervalo de tempo, ou seja, a velocidade da reação enzimática. No gráfico conseguiu-se observar que o aumento da concentração dos açúcares redutores leva a um aumento correspondente da absorvância.
4°) Determinação das Velocidades de Reação e Gráfico II:
[ ]1 sacarose hidrolizada
- V1= _______________________ = 0 mol/mL.min
10 min
- V2 = 0,0005/10 = 0,00005 mol/mL.min
- V3= 0,001/10= 0,0001 mol/mL.min
- V4= 0,0015/10= 0,00015 mol/mL.min
- V5= 0,0020/10=
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