A Genética Básica

...

→Fatores de iniciação→Fatores de alongamento→ Fatores de liberação

Tradução se inicia a partir do códon AUG (Metionina), essa metionina entra no sítio P (início da proteína)

tRNA leva o próximo aminoácido para o sítio A, que se liga a metionina e vai para o sítio P junto dela, e assim por diante...

Após o tRNA soltar seu aminoácido, ele vai para o sítio E, onde será liberado e reiniciará sua atividade.

Após a proteína ser formada, entra um códon de terminação (UAA, UAG, UGA) no sítio A. Códon de terminação faz com que o fator de liberação entre no sítio A → Cadeia polipeptídica é liberada → Unidades se dissociam.

Propriedades do Código Genético1) Código triplo: Cada aminoácido é formado por um três bases nitrogenadas (códon)

2) Código degenerado: Cada aminoácido é formado por mais de um códon, pois há mais códons que aminoácidos (20 aminoácidos)

3) Possui códons de iniciação (AUG) e terminação (UAA, UAG, UGA)

4) É quase universal

[pic 7]

→ FIM ←

Mutações Gênicas

Alteração do DNA em um local específico de um organismo→ Substituição, inserção ou deleção de bases→ Podem ocorrer em qualquer tempo e em qualquer célula do organismo

Mutações em células somáticas: são quaisquer células que não as germinativas, só afetam o organismo, então os descendentes serão normais.

Mutações em células germinativas: são células que darão origem aos gametas, e portanto, mutações nessas células serão transmitidas aos descendentes.

As mutações podem ser pequenas (visualizáveis apenas através de métodos genéticos ou bioquímicos) ou grandes, totalmente visível e podendo até ser letal → alterações drásticas em processos essenciais

Substituição (Transição ou Transversão)

Transição: substituição de uma purina por uma purina ou de uma pirimidina por uma pirimidina (A ←→ Guanina) ou ( T←→C)Transversão: substituição de uma purina por uma pirimidina ou de uma pirimidina por uma purina (A ou G ←→ T ou C)Mutação de ponto: afeta um único nucleotídeoMutação sinônima/silenciosa: não causa mudança de aminoácido, pois os aminoácidos são codificados por mais de um códon, então pode trocar o códon mas o aminoácido pode ser o mesmo.Mutação não sinônima: Causa mudança no aminoácido especificadoMutação não sinônima de sentido errado (missense): alteram um códon em outro, mudando o aminoácido. Podem codificar toda a proteína mas no final alterar o códon.Mutação não sinônima sem sentido (nosense): Coloca um código de terminação (stop códon) em algum lugar da sequência de aminoácidos antes de terminar a proteínaDeleção: remoção de um ou mais nucleotídeos na sequência de DNAInserção: adição de um ou mais nucleotídeos na sequência de DNAQuando são múltiplos de 3: causa a deleção ou inserção de um aminoácido na proteína codificadaQuando não são múltiplos de 3: Causam mudança na fase de leitura, alterando a sequência de aminoácidos

Mutações espontâneas: ocorrem naturalmente, ao acaso, com ou sem causa conhecida, pela mudança das bases nitrogenadas para suas formas tautoméricas ou erros na replicação

Bases nitrogenadas não são estáveis e mudam sua composição e voltam ao normal rapidamente. Se a replicação ocorrer quando a base estiver na sua forma tautomérica, há mutação.

Base normal p/ forma tautomérica: um hidrogênio muda de posição[pic 8]

Pareamento das formas tautoméricas

T ←→ G

A ←→ CMutações induzidas: causadas por um agente mutagênico.

Ex: radiações UV, raios X e gama, agentes químicos.

Agentes físicos: radiações ionizantes (raios-X, raios gama)

radiações não-ionizantes (luz UV)Agentes químicos: análogos de base ( 5- bromouracil análogo de timina)

agentes intercalantes (brometo de etídeo)

Metodologias Laboratoriais Utilizadas na Análise Genética 1

- Eletroforese

Separação de fragmentos de DNA ou proteínas (pela carga e peso molecular) em meio sólido (gel de agarose, poliacrilamida, amido)

Como realizar? Prepara-se o gel de agarose, coloca-se um “pente” específico nesse gel, para ter espaço para a colocação da amostra.

Após o gel secar, retira-se o pente e coloca-se as amostras (normalmente de DNA) dentro dos espaços feitos pelo pente. Após, liga-se um medidor de potencial e cátodo e ânodo → o DNA é uma molécula negativa, então ele irá migrar para o cátodo (positivo), realizando uma “trilha” pelo gel de agarose.

Essa amostra é corada com Brometo de Etídeo, que é submetida a luz ultravioleta (UV) e dessa forma pode-se observar as bandas de DNA que passaram pelo gel.

Reação em cadeia da polimerase (PCR)→ Obtenção in vitro de milhares de cópias de uma única sequência específica de DNA

Reagentes: dATP, dTTP, dCTP, dGTP

primers

MgCl2

DNA

Taq DNA polimerasemáquina de PCREtapas:

1) Desnaturação (separação da dupla hélice do DNA em fitas simples por meio de aquecimento a aproximadamente 94 graus)

2) Anelamento dos primers (pelo resfriamento)

3) Extensão (aquecimento)

4) Repetição do ciclo

Resultados:Ciclos Cópias 1 2

2 4

4 16

10 1024

15 32768

Visualização automática → por meio da aplicação de fluorescência pode-se observar por computadoresPCR vantagens → Alta especificidade, precisa de uma quantidade muito pequena de DNA, capacidade de amplificar especificamente