A IDENTIFICAÇÃO DE AMINOÁCIDOS E PROTEÍNAS

...

Ao se dizer que uma proteína é essencial, se refere ao fato de que ao longo da cadeia de aminoácidos que a compõem, estão inseridos aminoácidos essências par ao corpo humano (CHAMPE; HARVEY, 1996 apud NASCIMENTO, 2010).

-

Objetivos

2.1 Objetivo geral

Através do teste de Biureto fazer identificação de proteínas e com o teste de Ninhidrina identificar aminoácidos.

2.2Objetivos específicos

Descrever sucintamente os passos necessários para se alcançar o objetivo geral.

3. Material e métodos

3.1 Material

Água destilada, Leucina 0,1M, Lisina 0,1M, NaOH 2,5N, CuSO4 a 5%, NaCl, Uréia, Clara de ovo, Amido 0,1%, Solução de Ágar Mac Konkey.

3.2 Métodos

Para o experimento de identificação de aminoácido com Ninhidrina, preparou uma série de 5 tubos de ensaio identificados da letra “a” até “e”. Em cada tubo adicionou-se 1 mL de água, 1 mL de lisina 0,1M, 1 mL de solução MC Konkey diluídos e 1 mL de amido respectivamente. Acrescentou-se em todos os tubos 0,5 mL de solução de Ninhidrina 0,2% em acetona e aqueceu a solução em banho maria pelo período de 5 minutos, observando-se o resultado final.

No experimento de identificação de proteínas com Reativo de Biureto preparou-se uma série de 6 tubos de ensaio identificados por letras de “a” até “f”. Adicionou-se 1 mL de água, 1 mL de Leucina, 1 mL de lisina, 1mL de clara de ovo, 1 mL de amido 0,1% respectivamente cada qual em seu tubo. Acrescentou-se em todos os tubos 5 gotas de sulfato de cobre a 1% e 2 gotas de NaOH a 2,5N. Já no tubo “f” adicionou-se uma colher de uréia, que foi posteriormente aquecida dentro da capela e depois adicionado 4 gotas de CuSO4 e 2 gotas de NaOH observando-se o resultado final.

-

Resultados

Tabela 1: Resultados da identificação de aminoácidos

Tubos

Coloração

Interpretação

A

Incolor

Não há a.a livres

B

Roxo

Grande quantidade de grupo amino livre

C

Azul Marinho

Grande quantidade de grupo amino livre

D

Rosa fraco

Tem proteínas porém, poucos grupo amino livre

E

Incolor

Não há aminoácidos

Tabela 2: Resultados da identificação de proteínas

Tubos

Coloração

Interpretação

A

Azul claro – ficou verde com o passar do tempo

Não apresenta aminoácidos em sua composição

B

Azul

É um aminoácido, portanto não forma o complexo ligado ao cobre

C

Azul escuro

É aminoácido, portanto não forma o complexo ligado ao cobre

D

Roxo

Grande quantidade de proteínas, formando assim o complexo ligado ao cobre

E

Azul claro

É um carboidrato

-

Discussão

A coloração apresentada pelo teste com Ninhidrina se deve ao fato da mesma ter a capacidade de detectar grupos α – amino livres, que são encontrados em aminoácidos e nos grupos amino terminal de peptídeos e proteínas, sendo que em peptídeos e proteínas irá apresentar uma coloração menos intensa que a coloração em aminoácidos por possuírem menos grupos amino livres em sua constituição (BRUICE, 2006).

Ocorre a adição do nitrogênio nucleofílico à aldeídos e cetonas, formando assim uma imina (Figura 1). No caso da Prolina, que é uma amina secundária, a reação irá formar enamina ao invés de imina (Figura 2).

[pic 3]

[pic 4]

Em seguida ocorre uma descarboxilação graças ao grupo carboxilato ligado ao Carbono α, gerando assim uma nova imina, que por hidrólise irá formar um derivado da Ninhidrina aminado. Esse derivado adiciona à outra molécula de ninhidrina formando com produto uma imina de coloração violeta (Figura 3), sendo a coloração proporcional à concentração de grupo amino livre na solução. No caso da prolina e da 4-Hidroxiprolina o produto formado apresenta coloração amarela, pelo fato da enamina ser amarela e não reagir com outra molécula de ninhidrina (BRUICE, 2006).

[pic 5]

O Teste do Biureto é um teste geral utilizado para identificar proteínas e peptídeos com três ou mais aminoácidos. A reação do Biureto resulta na formação de um complexo entre o Cu2+ e as proteínas ou peptídeos com mais de dois aminoácidos presentes na solução (LEHNINGER, 2006).

O par de elétrons do nitrogênio, proveniente da ligação amida entre dois aminoácidos se encontram disponíveis, podendo servir como ligantes para o átomo de cobre II. Em meio alcalino o sulfato de cobre II apresenta coloração azul clara, em solução com a presença de proteínas e peptídeos forma produto de coloração violeta, confirmando a formação de complexos